Визначення резус-належності
У повсякденній практиці визначення резус-фактора проводиться або за допомогою антирезусних сироваток (анти-Д) або моноклональними анти-Д антитілами.
Визначення резус-фактора антирезусної сироваткою анти-д експрес-методом (в пробірках без підігріву).
Для проведення даного дослідження використовується універсальна антирезусного сироватка для експрес-методу (анти-Д). Досліджувана кров береться з пальця або з флакона з консервованою кров'ю безпосередньо перед дослідженням. На дно пробірки наносять одну краплю стандартної антирезусної сироватки для експрес - методу і додають одну краплю досліджуваної крові. Після чого обережними рухами домагаються, щоб утворилася рідина розтікалася по склу пробірки. Через 3 хвилини після внесення еритроцитів додають в пробірку 2-3 мл фізіологічного розчину. Пробірку обережно перевертають 3 рази. Потім Новомосковскют результат. Наявність грудочок агглютінати свідчить про вміст у еритроцитах резус-фактора. У разі резус-негативної крові аглютинація не спостерігається.
Визначення резус-фактора за допомогою моноклонального реагенту (Цоліклони анти-d Супер).
На тарілку наносять велику краплю реагенту (близько 0,1 мл). Поруч поміщають маленьку краплю (0,01-0,05 мл) досліджуваної крові і змішують кров з реагентом. Реакція аглютинації починає розвиватися через 10 - 15 сек. а чітко виражена аглютинація настає через 30 - 60 сек. Результати реакції враховують через 3 хв. Тарілку після змішування реагенту з кров'ю рекомендується похитувати не відразу, а через 20 - 30 сек, що дозволяє за цей час розвинутися більш повної крупнолепестковой аглютинації. Цоліклони анти-D Супер випускається у флаконах по 2, 5 або 10 мл (1 мл містить 10 доз). Термін зберігання - 1 рік в холодильнику при 2-8 ° С. Розкритий флакон можна зберігати в холодильнику протягом місяця в закритому вигляді.
Проба на індивідуальну сумісність крові донора і реципієнта по груповому фактору.
Проба на групову сумісність крові донора і реципієнта проводиться з кожним флаконом, безпосередньо перед гемотрансфузией, одночасно з визначенням групи донора і реципієнта при кімнатній температурі (від +15 о до +25 о С). За допомогою проби на групову сумісність встановлюють наявність або відсутність в крові реципієнта антитіл, спрямованих проти донорської крові з даного флакона. Природа антитіл, якщо вони виявляються, цієї пробою не встановлюється.
На тарілку наносять сироватку реципієнта, в неї поміщають в 10 разів меншу краплю донорської крові. Результат Новомосковскют через 5 хвилин, при наявності аглютинації додають краплю фізіологічного розчину і продовжують спостереження ще 2 хвилини. При негативному результаті аглютинація не настає і крапля залишається рівномірно забарвленою в червоний колір. Це означає, що в сироватці реципієнта антитіла проти еритроцитів донорської крові відсутні і протипоказань до переливання цієї пробою не встановлено.
Проба на індивідуальну сумісність крові донора і реципієнта по резус-фактору Rho (d)
Ця проба дає можливість з'ясувати наявність або відсутність антитіл системи резус в крові реципієнта, спрямованих проти еритроцитів донора. У пробірку поміщають 2 краплі сироватки крові реципієнта, 1 краплю 33% поліглюкіну і 1 краплю донорської крові. в неї в 10 разів меншу краплю крові донора. Вміст пробірки перемішують шляхом розмазування його по її стінках. Через 3 хвилини в пробірку додають 3 мл фізіологічного розчину хлориду натрію і після перемішування Новомосковскют результат. При позитивному результаті видно аглютинація еритроцитів, виражена в більшості випадків неяскраво. При негативному результаті аглютинація не настає і вміст залишається рівномірно забарвленою в рожевий колір. Позитивний результат вказує на те, що в сироватці реципієнта містяться антитіла, що викликають аглютинацію еритроцитів донора. Це означає, що кров несумісна і її переливати не можна. Негативний результат - відсутність аглютинації вказує і на те, що протипоказань до переливання даної пробою не виявлено. Постановка проби на резус-сумісність може в окремих випадках супроводжуватися виникненням помилкової реакції - псевдоаглютинації донорських еритроцитів в сироватці реципієнта. Диференціювати справжню і псевдоаглютинації можна тільки при розгляді під мікроскопом свіжоприготованого мазка. Результат враховується при малому збільшенні мікроскопа з окуляром. (Х15). Справжня аглютинація дає грудочки агглютінати у вигляді "тутових ягід" або "грон винограду". При помилковому позитивному результаті на тлі вільних еритроцитів видно різної довжини ланцюжка еритроцитів, що склалися в монетні стовпчики.
Слід пам'ятати: проба на резус-сумісність не замінює проби груповий сумісності і обмежуватися її проведенням не можна. Практика показує, що в ряді випадків проба на резус-сумісність буває негативною, в той час як на групову сумісність дає чітко позитивний результат, що вказує на неприпустимість переливання крові цього донора.