Методика визначення рівня гемоглобіну крові
Методика визначення рівня гемоглобіну крові. норма гемоглобіну
Дозування гемоглобіну має першорядне значення для оцінки еритроцитної розділу, оскільки являє собою функціональний елемент. З огляду на той факт, що гемоглобін в чистому стані виходить досить важко, і як такої не підлягає дозуванні, в поточній практиці застосовуються непрямі методи дозування.
Серед численних існуючих способів найбільш простим і точним методом гемоглобінометр вважається фотометричне визначення у вигляді ціанметгемоглобіна, а для еталонірованія фотометров - використання стандартних розчинів ціанметгемоглобіна, приготованих з людського гемоглобіну.
Принципи визначення гемоглобіну в крові. Залізосиньородистим калій окисляє залозисте залізо гемоглобіну, в результаті чого всі види гемоглобіну крові перетворюються в метгемоглобін. Останній комбінується з ціаністим калієм, утворюючи ціанметгемоглобін або ціангемоглобін - найбільш стійке похідне гемоглобіну.
Склад використовуваного реагенту наступний (по van Kampen-Zijlstra):
- Залізосиньородистим калій [K3Fe (CN) 6] 0,2 г
- Ціаністий калій (KGN) 0,05 г
- Монокаліевий фосфат (КН2РО4) 0,14 г
- Дистильована вода до 1000 мл
Показник водню реагенту повинен укладатися в межі від 7,2 до 7,5, бути прозорим і дуже стійким. Після приготування розчин пропускається через якісний паперовий фільтр і зберігається в герметично закритих балонах коричневого кольору, в холодильнику при температурі + 4 °. Зберігати не більше 1-2 місяців. Періодично перевіряти чистоту розчину, в разі необхідності повторно фільтрувати.
Розчин нетоксичний, оскільки концентрація ціанистого калію значно менше отруйної дози.
Техніка визначення гемоглобіну в крові. Влити 0,02 мл крові (що міститься в одній піпетці гемоглобін) в пробірку з 5 мл реагенту, перемішати і відставити на 20 хв. Прочет результату робити за допомогою фотометра з фільтром S53 в ванні, величиною 1 см, в порівнянні з дистильованою водою.
Концентрація гемоглобіну (в г / 100 мл крові) визначається за формулою: Гемоглобін в г / 100 мл = екстікція проби х К (стандартна концентрація гемоглобіну / стандартна екстинкція).
Калібрування фотометров здійснюється за допомогою стандартного розчину гемоглобіну, який у нас в країні поставляється бухарестським гематологічним Центром. Спосіб простий, точний, похибка мінімальна (± 2%), відтворюваність задовільна.
Нормальні значення коливаються в залежності від віку, статі висоти над рівнем моря.
У дорослого. чоловіків = 15 ± 2 г / 100 мл, а жінок = = 13 ± 2 г / 100 мл.
У дітей від дворічного віку до статевої зрілості значення зростають прогресивно від 11 до 13 г / 100 мл.