Техніка приготування основних поживних середовищ
Для культивування мікробів в лабораторних умо-вах готують поживні середовища з урахуванням потреби в поживних речовинах кожного виду окремо. Живильне середовище в своєму складі має містити вуглець, водень, кисень, азот, фосфор, сірку, магній, залізо, мікроелементи і біостимулятори росту.
Розрізняють поживні середовища природні (молоко, яйця, картопля і т. П.), Штучні, виготовлені з продуктів тваринного або раститель-ного походження, ісінтетіческіе (середовища Чапека, Сабуро). За консистенцією середовища можуть бути рідкими, напіврідкими і щільними.
Для приготування щільних середовищ в рідкі середовища додають агар-агар або желатин. Агар-агар є продуктом переробки висушених морських водоростей роду анфельция, що складається в основному з полісахаридів. У холодній воді агар-агар набухає і розм'якшується, в гарячій (90-100 ° С) розплавляється, утворюючи клееобразную масу. Застигає агар-агар при 40 ° С, утворюючи холодець. Як поживна речовина агар-агар мікробами не використовується.
Желатин отримують шляхом виварювання шкіри, кісток і сухожиль тварин. При нагріванні з водою желатин утворює колоїдний розчин, що застигає при 18-20 ° С в однорідний колоїдний холодець і рас-плавляющійся при 25-27 ° С.
В бактеріологічній практиці зазвичай застосовують середовища з продуктів тваринного і рослинного походження, що містять пептони, екстрактивні речовини м'яса, кров, сироватку, сусло, вуглеводи і т. П.
Необхідні поживні речовини повинні міститися в середовищі в доступній формі і в певних співвідношеннях.
Живильні середовища повинні бути стерильними (повинно бути забезпечено отримання чистих культур мікроорганізмів), прозорими (які виросли на них мік-роорганізми повинні бути добре видно і мати визна-поділену величину рН).
Зберігають готові середовища в прохолодному місці, в щільно закритих шафах або ящиках, що оберігає їх від швидкого висихання. Надовго зберігалися середовищах мікроби розвиваються слабо або зовсім не ростуть.
Живильні середовища прийнято ділити на три групи:
1) стандартні (універсальні) - призначаються для культивування більшості мікробів;
2) спеціальні елективні, виборчі - призначаються для вирощування тільки визначений-ного виду мікробів, зростання інших мікроорганізмів на цих середовищах пригнічується;
3) диференційно-діагностичні - призначаються для вивчення біохімічних властивостей мікробів з метою диференціювання різних видів мікроорганізмів.
Стандартні поживні середовища
Мясопептонний бульйон (МПБ). До складу МПБ входять м'ясна вода, пептони і кухонна сіль. Для приготування м'ясної води використовують свіже м'ясо великої рогатої худоби або коней. М'ясо звільняють від кісток, жиру і сухожиль і пропускають через м'ясорубку. Отриманий фарш заливають водою з розрахунку 1: 2 (наприклад, 1 кг фаршу заливають 2 л води). Ставлять на 18-20 год в прохолодне місце (4-6 ° С), потім кип'ятять протягом години і фільтрують через ватно-марлевий фільтр. Фарш віджимають, до фільтрату додають води до початкового об'єму, розливають його по колбам або бутлях і стерилізують в автоклаві при надмірному тиску 0,1 МПа протягом 30 хв. Або заливають дворазовим кількістю води, кип'ятять Протя-гом години, дають охолонути, фільтрують через ватно-марлевий фільтр. Фарш віджимають, до фільтрату додають води до початкового об'єму і стерилізують його протягом 30 хв при надмірному тиску 0,1 МПа.
При варінні м'ясної води на поверхні рідини з'являється деяка кількість жиру, який необ-обхідно зняти.
Для приготування МПБ до м'ясної води додають 1% пептона і 0,5% хімічно чистої кухонної солі, кип'ятять 10 хв, фільтрують через паперовий фільтр, встановлюють рН 7,2-7,4 додатком лугу або двовуглекислої соди і знову кип'ятять 10 хв. Профільтрований бульйон повинен бути кольору соломи і абсолютно прозорим. Бульйон розливають по пробірках і колб, закривають ватними пробками, пробки обв'язують пергаментним папером і стерилізують 20-30 хв при надмірному тиску 0,1 МПа.
Мясопептонний желатин (МТЖ). До мясопептонний бульйону додають 10% взимку і не менше 18-20% влітку подрібненого желатину і підігрівають в текучепаровом апараті до повного розчинення желатину. Подщелачивают середу до рН 7,2 шляхом додавання 10% -ного раствораNaОН. Після охолодження до 60 ° С освітлюють яєчним білком (в такій же кількості, як і для МПА), підігрівають в текучепаровом апараті 20-30 хв. У гарячому вигляді фільтрують через ватяний або марлевий фільтр і розливають по пробірках. Стер-лізуют дрібно по 15-20 хв три дні поспіль при температурі 100 ° С.
Картопляна середу. Відбирають великий картопля, промивають щіткою під водопровідною водою, видаляють шкірку і пошкоджені місця. Бульби знову миють під струменем водопровідної води і поміщають в 1% -ний розчин двовуглекислої соди на 2-3 ч для неї-централізації кислого середовища. З картоплі пробником вирізують стовпчики, діаметр яких повинен відповідати-вать ширині пробірок. Стовпчики поміщають в чашки з водою і розрізають по діагоналі на дві частини, підсуши-вают фільтрувальної папером і половинки поміщають в пробірки з перехопленням внизу (в нижню частину цих пробірок стікає вода, яка виділяється при стерилізації). Через брак спеціальних пробірок використовують звичайні-ні пробірки, помістивши на дно скляні або деревян-ні палички, а на них - картопля. Стерилізують при надмірному тиску 0,1 МПа протягом 20-25 хв.
Пептонна вода. Готують її різними способами. В 1 л дистильованої води розчиняють 5 г хімічно чистої кухонної солі і 10 г пептона і сте-ріліз в автоклаві при надмірному тиску 0,1 МПа протягом 10 хв. Для вирощування гнильних бактерій пептонную воду готують трохи інакше: в 1 л ді-стіллірованной води розчиняють 30 г пептона. Стер-товують при надмірному тиску 0,1 МПа протягом 20 хв. Концентрована глюкозопептонная середу. В 1 л води розчиняють 100 г пептона і 50 г кухонної солі, нагрівають до кипіння, фільтрують, додають 50 г глюкози, встановлюють рН 7,4- 7,6 (за допомогою насиченого розчину вуглекислої соди), розливають по 10 мл в колби і склянки ємністю 250 мл з поплавками і стерилізують 3 дні по 30 хв текучим паром. Розведена глюкозопептонная середу. В 1 л води розчиняють 10 г пептона і 5 г кухонної солі, нагрівають до кипіння і додають 5 г глюкози. Встановлюють рН середовища 7,4-7,6, розливають по 10 мл в пробірки з поплавками і стерилізують 3 дні по 30 хв текучим паром.
Сухий поживний агар. Містить рибний або м'ясний бульйон, агар, хлористий і фосфат натрій. До 5 г порошку агару додають 100 мл холод-ної дистильованої води. Ретельно збовтують і нагрівають при помішуванні до повного розчинення агару, не допускаючи пригорання. При необхідності розчин фільтрують, розливають по пробірках, стерилізують при надмірному тиску 0,1 МПа протягом 20 хв.