Лабораторна діагностика малярії
Виявлення плазмодіїв в товстій краплі і мазку крові
Паразитологічний діагноз малярії заснований на виявленні паразитів в забарвлених препаратах (товста крапля і мазок) крові. Паразити можуть бути присутніми в крові не тільки під час гарячкових нападів і проміжків між нападами, такими один за іншим, але і в перебігу тривалого періоду, протягом яких не спостерігається підвищення температури.
Наявність паразитів в крові при відсутності гарячкових нападів називається паразитоносійство. Такі люди є заразними для комарів. При масових обстеженнях слід брати кров незалежно від наявності нападів.
Техніка приготування і забарвлення мазка - мазок готують як зазвичай. Після того як мазок висохне, його фіксують в 96% етиловим спирті 15 хв. Або в метиловий спирт протягом 3 хв. Висушені після фіксації мазки забарвлюють фарбою Романовського, розведеною дистильованою водою. Фарбують протягом 30-50 хв, в залежності від якості фарби. Після фарбування препарат споліскують водою і висушують на повітрі.
Техніка приготування і забарвлення товстої краплі. На склі готують мазок, а потім на ще вологий мазок дають впасти краплині крові. Крапля рівномірно розтікається, утворюючи коло. Після того як крапля висохне, на мазку простим олівцем роблять відповідну відмітку. Препарат без фіксації забарвлюють. Потім обережно (щоб не змити краплю) препарат споліскують водопровідною водою і висушують. Мазки і товсті краплі микроскопируют імммерсіонной системою.
Морфологія малярійних паразитів в мазку крові. Мерозоіт, втілившись в еритроцит, перетворюється в молодої шизонт, що позначається як кільце. Потім паразит, збільшуючись, приймає амебовидную форму, при цьому зберігається просвіт (вакуоль) між ядром паразита і основною частиною його цитоплазми. У цитоплазмі паразита з'являються зерна пігменту. Амебовідние шизонт заповнює значну частину еритроцита, потім починає округлятися, вакуоль зникає (стадія підготовки до поділу), пігмент починає збиратися в окремі пучки.
Для пллазмодія малярії шизонти - стрічкоподібні форми. Ядро паразита починає ділитися, а потім цитоплазма паразита ділиться так, що до кожного дочірньому ядра прилягає окремий грудочку цитоплазми (меруляція). В результаті виходить купка мерозоитов - морула. Пігмент на стадії морули зібраний в одну компактну купу.
У пл. фальсіпарум скучіваніе пігменту настає ще до повного формування морули. Мерозоїти розходяться, потрапляють в плазму крові, частина з них гине, частина впроваджується в нові еритроцити.
Гамонти. Форма гамонти у всіх малярійних паразитів, за винятком тропічної малярії, кругла або злегка овальная.Прі тропічної малярії плазмодій має витягнуті гамонти з закругленими кінцями. Чоловічі і жіночі гамонти розрізняються між собою за величиною і структурою ядра інтенсивності забарвлення цитоплазми). Жіночі гамонти - ядро невелике, компактне; цитоплазма фарбується в інтенсивний блакитний колір. Чоловічі гамонти - ядро велике, цитоплазма фарбується блідо, часто зона навколо ядра приймає фіолетового відтінку.
Морфологія малярійних паразитів в товстій краплі. У товстої краплі, оскільки її фарбують в нефіксованому вигляді, еритроцити вилуговуються, а малярійні паразити зазнають значну деформацію. При чотириденної та тропічної малярії уражені еритроцити в товстій краплі вилуговуються повністю, також як і нормальні. При триденної малярії в товстій краплі строма еритроцитів зберігається і діагностика малярійного паразита по товстої краплі полегшується. Кільця в товстій краплі зазвичай зім'яті, витягнуті у вигляді знаку оклику, іноді розірвані у вигляді коми. Амебовідние шизонти часто бувають ущільненими, стрічкоподібні шизонти чотириденної малярії товстої краплі округлюються і не відрізняються від амебовідних шизонтів. Морули розпізнаються в товстій краплі легко.
Цитоплазма паразитів в результаті впливу хіміотерапевтичних препаратів фарбуються слабкіше, набуває склоподібний відтінок, стає вакуолизированной, розпадається на окремі грудочки, ядро стає пухкими або навпаки більш компактними. Іноді пігмент збирається в купки, виштовхує з паразита. У товстих краплях розпізнавання таких зазнали деформації паразитів стає більш важким, а іноді і неможливим.
Серологічна діагностика малярії включає імуноферментну агглютинацию, реакцію непрямої гемаглютинацію і інші, які мають найбільше значення в неендемічних районах.
У мазках крові і товстих краплях малярійні паразити можуть бути прийняті за мерозоіт, скупчення бляшок може симулювати Морула. У препаратах, забарвлених за Романовським, бляшки відрізняються від мерозоитов за такими ознаками: мерозоіт складається з червоного ядра і блакитний цитоплазми. Фон бляшки в мазку іноді забарвлюється в блідо-блакитний колір, однак її зернистість приймає червоний колір більш світлого відтінку, ніж у ядер мерозоитов.
У препаратах можуть бути виявлені також сторонні мікроорганізми, які за формою нагадують малярійних паразитів: грибки, одноклітинні водорості, свободноживущие найпростіші. Деякі одноклітинні форми з компактним ядром в центрі, забарвлюється за Романовським в яскраво-червоний колір, симулюють гамонти тропічної малярії. Їх легко відрізнити по відсутності пігменту. Вільно живуть найпростіші з одним або декількома джгутами можуть бути прийняті за стадію утворення чоловічих гамет малярійного паразита.
Дослідження комарів на зараженість малярійними паразитами
Комаров розкривають і визначають наявність ооцист на шлунку і спорозоїтів в слинних залозах. Ооцисти видно в нативних препаратах.
Незрілі ооцисти виглядають в таких препаратах, як круглі гомогенні освіти з пігментом, що складається з декількох грудочок.
У зрілих ооцист видно добре сформовані спорозоїти, тісно прилягають один до одного. Ряди спорозоїтів у вигляді частоколу розташовуються по відношенню один до одного під різними кутами, в результаті чого ооциста набуває мозаїчний вигляд, при натисканні покривного скла з ооцист виходять спорозоїти.
У слинних залозах спорозоїти розташовані рядами перпендикулярно до протоку слинних залоз, а також у вигляді конгломератів. У секреті слинних залоз спорозоїти потрапляють в навколишнє рідина, в якій добре помітні внаслідок їх рухливості.