Лабораторна діагностика малярії, довідник лікаря
ЛАБОРАТОРНА ДІАГНОСТИКА МАЛЯРІЇ
В організмі людини можуть паразитувати і викликати захворювання чотири види збудників малярії: Plasmodium vivax - збудник триденної малярії, Plasmodium malarjae - чотириденної малярії, Plasmodium falciparum - тропічної малярії і Plasmodium ovale - збудник, подібний збудника триденної малярії.
Комарі роду Anopheles maculipennis (самки) переносять збудники малярії від хворої людини до здорової. При укусі зі слиною комара в підшкірну клітковину людини потрапляють спорозоїти, які в подальшому розвиваються в клітинах мезенхимного походження - тканинна шизогонія. Після цього сформувалися молоді тканинні мерозоїти (кріптозонти) проникають в еритроцити і там проходять безстатевий цикл розвитку - еритроцитарна шизогонія. При триденної малярії, поряд з впровадженням тканинних мерозоїтів в еритроцити, частина їх знову потрапляє в клітини ретикулоендотеліальної системи, де повторює безпігментні (тканинної) цикл розвитку (параерітроцітарние форми).
Для тропічної малярії параерітроцітарние форми не характерні.
Тканинні мерозоїти проникають в еритроцити людини, де відбувається їх подальший розвиток - шизогонія. Юні шизонти в еритроциті є овальні тільця, що складаються з ядра, протоплазми і травної вакуолі. При фарбуванні препарату за методом Романовського - Гимзе паразит нагадує перстень, так як ядро забарвлюється в червоний колір, а протоплазма в синій. Таку форму паразит має протягом 6-8 ч. Потім протоплазмова частина збільшується і з'являється железосодержащий пігмент меланін або гемосидерин, який утворюється при переробці гемоглобіну плазмодієм. Збудник зростає, дорослий шизонт займає майже весь еритроцит. Плазмодій округляється, рух його припиняється, починається розподіл ядра - стадія морули. Пігмент концентрується в центрі клітини. При розподілі ядра і протоплазми утворюється 16-20-24 мерозоитов. В подальшому оболонки еритроцитів і морули руйнуються і мерозоїти потрапляють в плазму крові. Збережені в плазмі мерозоїти впроваджуються в нові еритроцити, повторюючи безстатевий цикл розвитку. Через 3-5 циклів шизогонії з деяких мерозоїтів утворюються статеві клітини - гаметоцити (чоловічі та жіночі) (рис. 28).
Подальший статевої цикл розвитку гаметоцити проходять при попаданні в організм самки комара анофелес.
У шлунку комара відбувається злиття мікрогамет (чоловічих статевих клітин) і макрогамета (жіночих), в результаті утворюється зигота, яка перетворюється в рухливу клітку - оокінету. Оокінета проникає під серозну оболонку шлунка комара і там перетворюється в ооцисту, а потім цисту, заповнену спорозоитами. Циста лопається і спорозоїти з лімфою поширюються по всьому тілу комара, потрапляючи також в його слинні залози. Тільки тепер комар може заражати людину при укусі. Спорогонія протікає при температурі зовнішнього середовища не нижче + 16 ° С, а для збудника тропічної малярії - не нижче + 18 ° С.
Для лабораторного підтвердження діагнозу з крові хворого готують мазок і товсту краплю, в якій ймовірність виявлення збудника велика (одне поле зору товстої краплі відповідає 50 полях тонкого мазка). Для ідентифікації збудника досліджують і мазок.
Товсту краплю готують наступним чином. На предметне скло наносять 2-3 краплі крові і розмазують її до діаметра десяти-копійчану монету. Кров підсушують на повітрі, потім до неї додають дистильовану воду для видалення з еритроцитів гемоглобіну, знову підсушують, фарбують за Романовським - Гімзою протягом 45 хв, після чого фарбу змивають, препарати підсушують і проводять мікроскопію.
Щоб приготувати мазок, на край предметного скла наносять невелику краплю крові. Другим склом зі шліфованим краєм рівномірно розмазують кров так, щоб вийшов тонкий препарат (мазок). Мазок висушують, фіксують сумішшю Нікіфорова, а потім фарбують фарбою Романовського - Гимзе протягом 30 хв, змивають водою, підсушують і проводять мікроскопію.
Мікроскопіруя препарати, розпізнають вид плазмодія. Еритроцити, в яких знаходяться збудники триденної малярії, збільшені в розмірах (в 1,5 рази), блідіше пофарбовані, в порівнянні з еритроцитами, вільними від плазмодіїв. В уражених плазмодіями еритроцитах з'являється ніжна, рівномірно червоного кольору зернистість, розподіляється по всьому еритроцити (шуфнеровская зернистість). Шизонт амебовидной форми, стадія морули має вигляд тутової ягоди. Еритроцити, які містять збудників чотириденної малярії, в розмірах не збільшуються. У перші 10 год паразит має форму кільця, менших розмірів, ніж збудник триденної малярії, потім шизонт приймає форму стрічки, розташованої поперек еритроцита. У цій стадії паразит займає 1 / 2-1 / 3 об'єму еритроцита, ядро лежить на краю стрічки. Стадія морули має форму розетки і включає 6-8-10 мерозоитов. Пігмент золотисто-жовтого кольору.
Форма і розміри еритроцитів при тропічній малярії не змінюються. В периферичної, крові дорослі шизонти і форми їх розподілу не зустрічаються, так як ці стадії відбуваються в кровоносних капілярах внутрішніх органів, мозку пристеночно. Це найдрібніший паразит з усіх збудників малярії. В стадії поділу він не займає діаметра еритроцита. У периферичної крові можна виявити юні шизонти у вигляді кілець, по 2-4 в одному еритроциті, і статеві клітини. В еритроцитах з паразитами з'являється груба зернистість у вигляді плям неправильної форми пурпурно-червоного кольору (мауреровская плямистість). Діагноз ставиться на підставі виявлення в периферичної крові юних шизонтів (по 2-3 в одному еритроциті) або дорослих гаметоцитов, які мають вигляд полулуния або сигари. Ядро в цих клітинах розташовано посередині і оточене зернами пігменту чорно-коричневого кольору.