Лабораторна діагностика ешеріхіозов - студопедія
Серед видів Escherichia coli семействаEnterobacteriaceae, поряд з непатогенних кишкових-ми паличками - представниками нормальної мікрофлори кишечника, є їх патогенні варіанти, в тому числі:
· Ентерогеморрагіческіе кишкові палички (ЕГКП) - збудники ентерогеморрагіческого ешеріхіоза з гемолітико-уремічний синдром);
· Ентероінвазівние (ЕІКП), що викликають заболева-ня, подібні з дизентерією;
· Ентеротоксигенні (ЕТКП), що викликають холероподібний ешеріхиоз або діарею мандрівників;
· ЕПКП (ентеропатогенні) - збудники дитячих коліентеритів та інших кишкових інфекцій, а також уропатогенние ешерихії, що вражають сечовивідні шляхи.
Найбільш часто зустрічаються серовар патогенних ешерихій, що входять до складу перерахованих груп, представлені в таблиці 11.
Таблиця 11.Серовари найбільш часто зустрічаються патогенних ешерихій.
ПРО6, О8, О15, О20, О25, О27, О63, О78, О80, О85, О115, О128, О139, О148, О153, О159, О168
О18, О44, О55, О111, О112, О114, О119, О125-128, О142
О28, О29, О124, О136, О143, О144, О152, О164, О167
Частина ешерихій відноситься до умовно-патогенних мікроорганізмів, здатних викликати оппортуні-стические інфекції (пневмонії, нагноєння ран і порожнин, ме-нінгіти, сепсис і т.д.). При накопиченні в харчових продуктах ешерихії можуть стати причиною харчового отруєння. Методи мікробіологічної діагностики ешеріхіозов відображені в схемі 11.
Бактеріоскопічний метод в діа-гностики ешеріхіозов в практиці бактеріологічних лабораторій не застосовується через схожість морфологічних ітинкторіальних властивостей патогенних і умовно-патогенних ентеробактерій.
Бактеріологічний метод є основним методом діагностики ешеріхіозов. Для виділення ешерихій використовують середовища Ендо, Левіна і середу Мак-Конки з сорбітом для виділення Escherichia coli 0157. HIіз группиЕГКП.
Схема 11.Мікробіологіческая діагностика ешеріхіозов
Експрес-методи (індікаціяпатогенной E.coli або її продуктів в досліджуваному матеріалі) ДНК-зонди або ПЛР для виявлення специфічного фрагмента ДНК патогенної E.coli РИФ
Через 18 -24 год інкубації при 37 0 С вивчають характер колоній (гладкі, опуклі, з рівними краями колонії, забарвлені в червоний колір в результаті розкладання лактози, з характерним металевим блиском), які виросли на щільних поживних середовищах. Патоген-ні ешерихії за морфологічними, тинкторіальними, культуральними та біохімічними властивостями не відрізняються від звичайних ешерихій, що мешкають в кишечнику людини. Виняток становлять лактозоотріцательние ЕПКП. Належність виділених мікро-організмів до патогенних ешерихій встановлюють по ан-тігенной структурі за допомогою ОРА з сумішшю специфічних ешеріхіозной ОК сироваток і вмісту 10 лактозопозитивних колоній. На середовищі Мак-Конки з сорбітом ЕГКП утворюють безбарвні колонії, тоді як інші ешерихії фер-ментіруют сорбіт, утворюючи червоні колонії.
При позитивному результаті РА решту колонії пересівають уколом в стовпчик і штрихом на поверхню скошеної частини середовища на комбіновану полуско-шенную поліуглеводную середу (наприклад, Ресселя) з метою накопичення культури.
На 3-й день враховують зміни на середовищі Ресселя. Ферментацію глюкози з утворенням кислоти або кислоти і газу виявляють щодо змін стіл-бика агару (пожовтіння і його розриви середовища в результаті ферментації глюкози в анаеробних умовах) і скошеної частини (пожовтіння в результаті ферментації лактози і сахарози). При відсутності ферментації вуглеводів середу набуває лужну реакцію за рахунок виділення амінів при розкладанні бел-ка і набуває червоного кольору. Перевіряють чистоту виділеної культури, визна-ділячи її біохімічні властивості (посів на середовища Гіссен); проводять серотіпірованіе шляхом постановки спочатку орієнтовною РА на склі з полівалентною ОК-сироваткою, а потім - розгорнутої РА з адсорбованими груповими си-воротка для визначення ОК-серогрупи. Можна використовувати латексні діагностикуми, покриті відповідними до-ми антитілами (реакція латексної аглютинації).
Антигенну формулу виділеної культури визначають за результатами постановки розгорнутої РА з ОК сироваткою (або діагностичним імуноглобуліном) і жи-вої культурою (типування по К-антигену), а також розгорнутої РА з ОК сироваткою і Грета (кип'яченою протягом 1-2 ч) культурою з метою визначення специфічного О-антигену. Кип'ятіння або автоклавирование руйнує поверхно-стно розташований К-антиген, який заважає визначенню специфічного О-антигену. Через добу інкубування при 37 0 С гомологічні сироватці штами повинні агглютинироваться до титру або до половини титру сироватки.
Культуру, позитивно прореагували в розгорнутій РА з однією з сироваток, засівають на диференційно-діагностичні середовища для остаточної іден-тіфікаціі. Для виявлення джерела інфекції і шляхів зараження у ви-поділеної штаму визначають фаговар і коліціногеновар.
У ви-ділених культур або в патологічному мате-ріалі можна визначити адгезивность і інвазивність мікроскопічним методом з використанням культур тканини Нер-2 або HeLa, а також плазміди вірулентності за допомогою ДНК-зондів або ПЛР.
Для прискореної ідентифікації збудника в досліджуваному матеріалі застосовують прямий або непрямий РИФ.
Серологічний метод є допоміжним, спрямованим на виявлення антитіл і їх динаміки в процесі інфекції (дослідження парних сироваток) за допомогою РА, РНГА, ІФА.