Визначення концентрації гемоглобіну
Найважливіші з методів визначення концентрації гемоглобіну - колориметрические. Вони широко застосовуються на практиці з огляду на їх простоти і доступності.
Гематитові метод (метод Салі). Заснований на перетворенні гемоглобіну при додаванні до крові хлористоводневої кислоти в хлоргемін (хлорид гематиту) коричневого кольору, інтенсивність забарвлення якого пропорційна вмісту гемоглобіну. Отриманий розчин хлориду гематиту розводять водою до кольору стандарту, відповідного відомої концентрації гемоглобіну.
Визначення проводять в спрощеному колориметрі - гемометра Салі. Цей прилад складається з пластмасового штатива з 3 вертикальними гніздами. У бічних гніздах перебувають 2 зупинено пробірки зі стандартною рідиною. У середній гніздо гемометра вставляють відкриту зверху градуированную скляну пробірку того ж діаметру, що і кольорові стандарти. Градуйована пробірка має шкалу з поділками, що показує кількість гемоглобіну в грамах на 100 мл крові, тобто в грам-відсотках (г%). При гемометра є спеціальна піпетка для води і скляна паличка для перемішування.
У градуйовану пробірку наливають до поділу, позначеного цифрою "2 г%" (нижня кругова мітка) 0,1 г% розчин хлористоводневої кислоти.
Потім набирають кров в капілярну піпетку до мітки "0,02 мл", всмоктуючи її ротом через гумову трубку (необхідно, щоб стовпчик крові закінчувався точно на рівні мітки і не розривався бульбашками повітря). Обтерши кінчик піпетки зовні ватою, опускають її в пробірку з 0,1 г% розчином хлористоводневої кислоти і обережно видувають кров. Повторними всмоктування й видування верхнього шару рідини піпетку обполіскують. Пробірку кілька разів струшують і, помітивши час, ставлять в штатив. Для повного перетворення гемоглобіну в хлорид гематиту потрібно не менше 5 хв. Через 5 хв гемометр піднімають до рівня очей і порівнюють колір випробуваної рідини з кольором стандартів. Зазвичай (за винятком випадків вкрай важкої анемії) він темніше, ніж в стандартних пробірках. За допомогою неградуйований піпетки до випробуваному розчину додають по краплях дистильовану воду, перемішують скляною паличкою і порівнюють зі стандартами. Як тільки колір досліджуваної рідини буде дорівнює з кольором стандартів, відзначають, якого поділу шкали відповідає рівень рідини (по нижньому меніску) в пробірці.
Промисловість випускає гемометра, що містять грам-відсоткову шкалу.
За ідеальну норму приймають концентрацію гемоглобіну в крові, що дорівнює 16,67 г%, або 166,7 г / л.
При дотриманні всіх правил роботи з гемометра у одного і того ж хворого при визначенні гемоглобіну в різних порціях крові отримують розбіжність результатів в межах ± 0,3 г% (3 г / л).
Ціанметгемоглобіновий метод найбільш точний, прийнятий в більшості країн як стандартний.
Він заснований на перетворенні гемоглобіну в ціанметгемоглобін при додаванні до крові реактиву. Концентрацію ціанметгемоглобіна вимірюють фотометричним. Як реактиву вживають розчин Драбкіна (NaHCO3 - 1 г, KCN - 0,05 г, K3 [Fe (CN) 6] - 0,2 г, дистильованої води - до обсягу 1 л) або який-небудь інший з подібною дією.
Під впливом железисто-сінеродістого калію гемоглобін окислюється до метгемоглобіну (гемоглобіну), який потім перетворюється за допомогою ціаніна калію в ціанметгемоглобін (гемоглобінціанід). Найбільш уживане розведення крові в реактиве Драбкіна - 1. 250 (0,02 мл крові і 5 мл реактиву). Через 20 хв, необхідних для повного перетворення гемоглобіну в гемоглобінціанід, вимірюють екстікцію при довжині хвилі 540 нм і товщині шару в 1 см проти води на спектрофотометрі СФ-4 або на ФЕК-М і йому подібному фотоелектроколориметри.
В даний час створені міцні ціанометгемоглобіновие стандарти в ампулах, відповідні точно певної концентрації гемоглобіну.
Отримані розчини досліджують на фотоелектроколориметри і викреслюють калібровану криву, відкладаючи показники оптичної щільності зі шкали приладу (червоні цифри барабана) на осі ординат, а концентрацію гемоглобіну в грамах на літр на осі абсцис. На підставі калібрувальної кривої створюють робочу таблицю, яка вказує, яка концентрація гемоглобіну відповідає даного показання ФЕК.
Існують колориметри, спеціально розроблені для визначення гемоглобіну, - гемоглобінометри. У більшості з них використовується ціанметгемоглобіновий метод. Гемоглобінометри можуть працювати незалежно або в комплексі з лічильниками частинок. Так, гемоглобінометр "Культера" (Франція), який можна застосовувати самостійно, дає прямі свідчення гемоглобіну в грамах на 100 мл. Прилад має високу точність і відтворюваність ± 0,1 г% (1 г / л).