Виявлення вірусних антигенів (аг)
Виявлення вірусних антигенів (Аг). ІФА. Гібридизація ДНК. ПЛР. Методи діагностики мікозів (грибкових захворювань).
Виявлення вірусних антигенів (Аг).
ІФА. В даний час вже з'явилися комерційні набори для виявлення Аг деяких збудників, що дозволяють їх ідентифікувати протягом 5-10 хв. Для виявлення Аг на твердій фазі сорбують відомі AT і додають сироватку, що містить Аг; після інкубування незв'язаний Аг декантирують, систему промивають і вносять мічені AT, специфічні до сорбованих AT. Повторюють процедуру інкубування та відмивання, вносять хромогенний субстрат, позитивний результат фіксують при зміні забарвлення системи.
Гібридизація ДНК - високоспецифічний метод, що дозволяє ідентифікувати геном вірусу після його гібридизації комплементарними молекулами ДНК. Як маркера застосовують ферменти і ізотопи. Метод визначає здатність вірусної ДНК гібрідізіруют-тися з міченої комплементарної ДНК; специфічність методу прямо пропорційна довжині комплементарної ланцюжка. Перспективний метод гібридизації нуклеїнових кислот in situ. Для постановки реакції мічену ДНК наносять на біоптати тканин (в тому числі на фіксовані формаліном або ув'язнені в парафінові блоки) і реєструють взаємодія з комплементарної ДНК. Метод використовують для виявлення вірусів простого герпесу, папіломи людини, Епстайна-Барр та ін.
Методи діагностики мікозів (грибкових захворювань)
Мікроскопія - один з основних методів виявлення збудників мікозів. Дозволяє проводити експрес-діагностику мікозів і отримувати результат протягом 1-2 ч, тоді як для виділення культури збудника необхідні тижні. Для експрес-діагностики препарати часто необхідно фарбувати спеціальними барвниками, так як проста забарвлення гематоксиліном і еозином часто не дозволяє виявити клітини грибів.
Незабарвлені препарати грибів
Мікроскопія методом висячої чи роздавленої краплі. Метод дозволяє виявити структури грибів в клінічних зразках без попереднього фарбування.
Обробка 10% їдким калієм (КОН). Метод використовують в першу чергу для візуалізації структур збудників в фрагментах шкіри і її придатках (нігті, волосся), виділеннях вогнищ ураження і піхви. У зазначених зразках міститься велика кількість клітин, в яких КОН руйнує кератин, залишаючи незміненими клітини грибів.
Пофарбовані препарати грибів. Забарвлення мазка грибів.
• Забарвлення мазка грибів по Граму. В мазках з клінічного матеріалу гриби представлені грампозитивними клітинами. Клітини Cryptococcus neoformans погано сприймають барвники, що можна використовувати як диференційно-діагностична ознака при мікроскопії забарвлених мазків СМЖ.
• Забарвлення мазка грибів нігрозину або тушшю по Буррі мазків СМЖ дозволяє виявити капсульованих клітини Cryptococcus neoformans. Для ідентифікації цього мікроорганізму можна використовувати муцікармін або конго червоний.
• Забарвлення мазка грибів за Романовським-Гімзою або Райту мазків крові і кісткового мозку дозволяє виявити дріжджову форму Histoplasma capsulatum в цитоплазмі фагоцитів.
• Забарвлення мазка грибів метенаміновим срібним по Гоморі. Метод включає попередню обробку гістологічних препаратів хромової кислотою з подальшим нанесенням барвника (клітини грибів темно-сірі або чорні).
• Забарвлення мазка грибів по Грідлі. Метод включає попередню обробку препаратів хроматом лейко-фуксину з подальшим нанесенням фуксіновий альдегіду і метанілового жовтого (клітини грибів рожево-пурпурні на жовтому тлі).
• Фарбування перйодной кислотою і реактивом Шиффа (по Мак-Мануу). 1,2-Глікольние угруповання полісахаридів клітинних стінок грибів спочатку окислюються перйодной кислотою до альдегідів, що реагують з сульфитом лейкофуксіна реактиву Шйффа; клітини фарбуються в насичено рожевий або червоний колір.
Иммунофлюоресцентная мікроскопія грибів
Найбільшого поширення знайшла РИФ. Застосовують AT, мічені флюоресцеином; для виявлення грибкових Аг реагент наносять на гістологічний препарат, інкубують і проводять люмінесцентну мікроскопію.