Протокол мікробіологія №5
Визначити чутливість до антибіотиків
1.Визначення чистоти виділеної культури.
Про чистоту культури свідчить однорідність зростання і наявність в препараті мікроорганізмів одного виду. Тому при макроскопічному дослідженні зростання, відзначаємо інтенсивність (убогий, помірний, рясний), прозорість, колір звертаємо увагу на його однорідність. Приготуємо фіксований препарат, торкнувшись петлею нижньої, середньої і верхньої частини косяка, забарвимо по Граму і промікроскопіруем.
Проведемо посів чистої досліджуваної культури на «строкатий ряд»: напіврідкі середовища Гіссен з індикатором ВР, вуглеводами (глюкоза, лактоза, маніт) і МПБ.
Пересівши в напіврідкі середовища здійснюємо бактеріологічної голкою або бак. петлею діаметром 1 мм уколом в товщу агару, не доходячи до дна пробірки 1 мм. При пересівання в рідкі середовища петлю з біомасою досліджуваної культури занурюємо в рідину, розтираємо на стінці пробірки і змиваємо. Після цього між стінкою пробірки і пробкою поміщаємо індикаторні папірці для визначення індолу і сірководню, не допускаючи змочування країв пробірки і пробки живильним середовищем
Основою вивчення біохімічних властивостей мікроорганізмів з метою їх ідентифікації є визначення проміжних і (або) кінцевих продуктів метаболізму. Таксономическое значення мають сахаролитические і протеолітичні властивості бактерій, які визначають на диференційно-діагностичних середовищах, що входять до складу «строкатого ряду».
Визначення сахаролитических властивостей проводиться на середовищах Гісса. Їх склад: пептонна вода, 1% вуглеводу, індикатор Андреде (ВР або ін.), 0,3-0,5% агару, якщо середовище напіврідка; якщо середу рідка, то в пробірки опускають поплавці (короткі скляні трубочки, зупинено з одного кінця).
Визначення протеолітичних властивостей проводиться на пептонній воді (ПВ) або м'ясо-пептонном бульйоні (МПБ) з урахуванням освіти кінцевих продуктів метаболізму білків (пептона, амінокислот) - індолу, а в ряді випадків аміаку.
Освіта індолу супроводжується фарбуванням в рожевий колір індикаторного папірця, просоченої розчином щавлевої кислоти (метод Мореля); освіту сірководню - почорніння індикаторного папірця, просоченої ацетатом свинцю; утворення аміаку - посинінням лакмусового папірця.
3.Посев досліджуваної культури в стовпчик напіврідкого агару.
Проведіть посів досліджуваної культури в стовпчик напіврідкого агару уколом за допомогою бак. голки або бак. петлі діаметром 1 мм.
Посів культури в стовпчик напіврідкого агару дозволяє визначити її ставлення до молекулярного кисню, а значить і побічно скласти уявлення про спосіб отримання енергії.
Визначення антибіотикограми досліджуваної культури
Для визначення антибіотикограми приготуємо суспензія досліджуваної культури в стерильному фізіологічному розчині і доведіть до каламутності 0,5 по МакФарланд. Для посіву використовуємо стерильний ватний тампон, який занурте в пробірку з суспензією, ротується його, щоб він рівномірно просочився, а потім ретельно відіжміть про суху стінку пробірки вище рівня рідини шляхом покручіванія. Посів культури на чашку із середовищем АГВ проведіть штрихами в трьох напрямках під кутом 60 °, кожного разу повертаючи чашку навколо своєї осі. На закінчення зробіть кілька обертальних рухів тампоном по краях агаровой поверхні. Після цього посівам дайте можливість підсохнути протягом декількох хвилин при кімнатній t ° в чашках з закритими кришками. Диски з антибіотиками нанесіть не пізніше 15 хв після інокуляції стерильним пінцетом або за допомогою автоматичного діспенсора Відстань від диска до краю чашки і між дисками повинна бути 15-20 мм. Таким чином, на одну чашку діаметром 100 мм поміщають не більше 6 дисків. Кожен диск слід акуратно притиснути пінцетом, щоб забезпечити його контакт з живильним середовищем. Чашки безпосередньо після накладення дисків підпишіть і помістіть догори дном в термостат при 37 ° на 18-20 год.
1.Визначення чистоти виділеної культури.
Проведено огляд пробірки зі скошеним агаром, виявлений однорідний зростання, інтенсивність - помірна, напівпрозорий колір.
Виготовлений фіксований препарат, (забарвлення за Грамом). У препараті мікроскопією виявлено грам-палички червоного кольору.
Здійснено посів чистої досліджуваної культури на «строкатий ряд»: напіврідкі середовища Гіссен з індикатором ВР, вуглеводами (глюкоза, лактоза, маніт) і МПБ. дослідження триває
3.Посев досліджуваної культури в стовпчик напіврідкого агару.
Зроблено посів досліджуваної культури в стовпчик напіврідкого агару уколом. дослідження триває
4. Визначення антибіотикограми досліджуваної культури.
Виконано диско-дифузійний метод. Дослідження триває.
Встановили чистоту виділеної культури - грам-палички синього кольору.
Визначення біохімічних властивостей і чутливості до антибіотиків - дослідження триває.