Державне управління ветеринарії Житомирського краю, г
Н.В.Ковалюк, кандидат біологічних наук зав. лабораторією біотехнології СКНІІЖ, проректор Житомирського регіонального інституту агробізнесу
В.Ф.Сацук, кандидат сільськогосподарських наук, директор ТОВ ІПСХП "Астер"
Е.В. Мачульская, молодший науковий співробітник лабораторії біотехнології СКНІІЖ
ДНК - обов'язковий компонент будь-якого живого організму (виняток становлять лише РНК містять віруси на певних стадіях свого існування). У миші і людини, кишкової палички та слона ДНК влаштована по одному прінціпу- це полімерна макромолекула, що складається з ланок - нук-леотідов. Нуклеотиди бувають 4 видів: А, Т, G і С. У всіх живих істот A, T, G, C - нуклеотиди зустрічаються в складі ДНК, але в різних комбінаціях. Чим ближче один до одного види розташовані на еволюційної сходах-це, тим сильніше схожі їх послідовності ДНК, в той же час навіть у представників однієї родини можна знайти такі ділянки ДНК, які будуть строго індивідуальні.
Використання цього біологічного властивості лягло в основу методу полімерних-різному ланцюгової реакції (ПЛР), який за оцінкою американського журналу "Science" є найвидатнішим відкриттям останніх років.
У сприятливих умовах вбудований провірус формує нові віріони; які відокремлюються від клітинної мембрани для інфікування нових клітин.
Для діагностики лейкозу застосовують клінічний, патологоанатомічний, гістологічний, гематологічний, серологічний і молекулярно - біологічний методи.
Все розмаїття клінічних ознак лейкозу можна поділити на специфічні і неспецифічні. Більшість дослідників вказують на первинне поява неспецифічних ознак, а потім з'являються специфічні, за якими можна поставити діагноз (Н. В. Румянцева, Т.М. Шатернікова, 1963; Г.А. Симонян, 1963; Е.М. ним і ін. 1970). У міру розвитку захворювання у окремих тварин розвивається зниження реактивності, млявість. Порівняно рано у хворих на лейкоз тварин реєструють порушення серцево - судинної діяльності (глухі тони серця, іноді їх роздвоєність), пульс слабкого наповнення, можлива аритмія. До числа неспецифічних ознак лейкозу відносяться нерегулярне жуйка, проноси, 'запори.
Специфічні клінічні ознаки характеризуються прогресуючим збільшенням поверхневих (привушних, підщелепних, пропоз про патокових, колінної складки, надвименние), а також внутрішніх лімфатичних вузлів, екзофтальм. (В. М. Лемеш і співавт. 1987).
Однак, як і будь-який діагностичний метод, РІД не позбавлений недоліків.
Так, наявність у лейкозу латентної стадії, коли в крові відсутні антитіла до вірусу) ускладнює діагностику захворювання. Експериментально встановлено, що після зараження прихований період інфекції (період від моменту зараження до появи антитіл до вірусних антигенів) триває від 2 тижнів до декількох місяців, з цього, поступово виводячи з стада РІД
позитивних тварин, теоретично можливо домагатися повного оздоровлення господарства від лейкозу (A. Burny, Bruck С, Cleuter Y. 1985). Проте, в оздоровлених стадах, які не мали контактів з іншими, через кілька місяців або навіть років виділяють тварин з антитілами до ВЛКРС (В. М. Нахмансон, 1986). Це можна пояснити характерним для лейкозу явищем імунологічної толерантності, коли спостерігають вірусоносійство без ан-тітелообразовані'я. імунологічна толерантність
В даний час, широке застосування методу ПЛР в діагностиці лейкозу, на наш погляд, стримується наступними чинниками: високою вартістю обладнання та реактивів для ПЛР, відсутністю на ринку сертифікованих діагностикумів і не до кінця усвідомлені місцем ПЛР-діагностики в системі протіволейкозних заходів.
негативних тварин, при такому комбінованому використанні діагностичних методів гарантовано швидке і ефективне оздоровлення стада.
Важливою сферою застосування ПЛР є дослідження імпортованого худоби, що знаходиться в карантині, з метою запобігання завезенню ВЛКРС з однієї країни в іншу.
Таким чином, можливі, принаймні, три області успішного застосування методу ПЛР в діагностиці лейкозу: виявлення носіїв провірусноі ДНК серед РІД і ІФА-негативних тварин, дослідження знову завозяться в хозяйствожівотних і виявлення заражених телят в ранньому віці.
У лабораторії біотехнології СКНІІЖ з використанням методу ПЛР досліджено 1013 зразків крові на наявність провірусноі ДНК ВЛКРС. У таблиці 1 наведені дані по інфікованості тварин різних господарств ВЛКРС.
Аналізуючи отримані результати, хотілося б відзначити наступне. Тварини лише одного з господарств (СЗАО СКВО) виявилися повністю вільні від носи-тва провірусноі ДНК ЛКРС. Телиці голштинської чорно-рябої породи в це господарство було завезено з Голландії і не мали контактів з місцевими тваринами. Серед інших імпортних тварин (ВАТ "Племзавод" Кубань "п = 354, завезені з Угорщини) методом РІД були виявлені позитивно реагують, а за допомогою ПЛР вдалося виявити 1 носія провірусноі ДНК ЛКРС. Більш того, провірусну ДНК виявили і в пробі крові теляти , отриманого від ПЛР - позитивного тварини. Носії провируса були видалені з стада. У господарстві ТОВ "Тваринницький комплекс" Ольгинській "з 97 проаналізованих зразків 67 були отримані від РІД - негативних тварин. 15 з них виявилися ПЛР _ позитивними.
Аналізуючи дані по носія про-вірусу, встановили, що відсоток інфікованих телят до 3-4 місяців (на підставі ПЛР - досліджень) практично відповідає відсотку РІД - позитивних тварин того ж господарства, але в більш пізньому віз
расті (до 3 років). Це, швидше за все, свідчить про те, що зараження тварин відбувається в ранні терміни життя (транспла-центарно і до 3 міс), а перші імунологічні ознаки хвороби з'являються у більшості тварин після першої лактації. •
Отже, якщо проводити поділ теличок методом ПЛР на носіїв провируса і здорових в перші 2-3 тижні життя тварини, можна оздоравлі-вать господарства значно швидше.