Використовується сироватка діагностична сальмонельозна адсорбована для ра
Препарат являє собою ліофілізований імунні адсорбовані сироватки крові кролів або баранів. Адсорбовані сироватки містять антитіла, які агглютинируют культури сальмонел, що містять гомологічні О-і Н-антигени, і не агглютинируют культури сальмонел, що містять гетерологічние О-і Н-антигени.
Призначення: серологічна ідентифікація бактерій роду Salmonella в реакції аглютинації на предметному склі.
1. Препарат після розкриття ампули розчинити в 1 або 2 мл 0,9% розчину натрію хлориду. Розчинені сироватки можуть зберігатися в пробірках, закритих гумовими пробками при температурі 7 градусів протягом 1 міс.
2. На предметне скло нанести піпеткою краплю розчиненої сироватки, поблизу неї петлю культури, вирощеної протягом 18-24 год на живильному скошеному агарі при температурі 37 градусів, розтерти її в сироватці. Для визначення О-антигену слід брати культуру з верхньої частини агару, а для визначення Н-антигену-з нижньої частини агару.
3. Проводиться облік результатів:
++++ -виразний агглютінати при повному просвітління рідини
+++ -виразний агглютінати на тлі мутнуватої рідини
++ -незначний агглютінати на тлі каламутній рідини
+ -незначна кількість агглютіната на тлі каламутній рідини
-гомогенна каламутна рідина
Позитивною вважається реакція аглютинації інтенсивністю не менше, ніж +++.
8. Диференціація (РА з сальмонельозний бактеріофагів).
9. Видача результатів.
10.05 -робота в серологіі- провела РПГА (реакція Хеддельсона при бруцельозі).
Підготовка посуду до серологічного дослідження.
Обробка планшет: 1. Витримують в 1% розчині соляної кислоти не менше 1 ч.
2. Промивають в теплій мильній воді, протираючи кожну лунку тампоном з ватою.
3. прополіскуйте 20 раз в проточній воді.
4 .Залівают дист. водою і залишають до ранку.
5. Вранці зливають воду з планшет.
6. Підсушують при кімнатній температурі.
7. Перед постановкою реакції кожну лунку протирають тампоном з ватою, змоченою в фізіологічному розчині.
Обробка посадок на дозатор
1. Укласти насадки в скляну ємність і залити 3-6% розчином перекису водню.
2. Помістити ємність з насадками в термостат, нагрітий до температури 50 градусів і витримати при цій температурі протягом 3 год.
3. Перекласти насадки в ємність з дистильованою водою, закрити кришкою і витримати при кімнатній температурі 5 хв.
4. Висушити насадки при температурі 50 градусів 15 хв.
Перевірила рН фізіологічного розчину за допомогою індикаторного смужки (в нормі рН = 7,2-7,4)
Пластинчастий метод (реакція аглютинації на склі)
1. Одягла маску і рукавички, реакцію ставлю на звичайному, ретельно вимиті, знежиреному склі.
2. розкреслюють скло на квадрати, величиною 4х4 см кожен.
3. Зверху записую номери випробуваної сироватки
4 .У наступні квадрати розливаю мікропіпеткою випробувану сироватку в наступних дозах: 0,04; 0,02; 0,01 мм, контроль сироватки та антигену.
5. Сироватку обережно змішую з антигеном скляною паличкою, починаючи з мінімальної дози.
6 .Стекло злегка підігрівають над полум'ям пальника так, щоб відбувалося рівномірне нагрівання всієї поверхні скла. У разі позитивної реакції в перші ж хвилини в краплях сироватки з антигеном з'являються пластівці.
7 .Обработала стіл дез.средства
8. Зняла маску і рукавички, вимила руки.
Підготовка сироватки крові-6
Реакцій Хедельсона і Райта-1
Облік імунологічних реакцій-1
Дванадцятий день практики.
Санітарно-бактеріологічне дослідження води.
Мета: Відбір проб водопровідної води і посів по ГОСТу методом мембранних результатів. Відбір проб харчових продуктів. Відбір проб повітря в боксі на кількість бактерій. Облік і видача результатів.
Метод мембранних фільтрів.
Перший день дослідження
У воронку змонтованого і простерилізованого фільтрувального приладу Зейтца наливають відміряний об'єм досліджуваної води. За допомогою насоса створюють вакуум в приймальному посудині (зазвичай воду фільтрують через фільтри № 2 і 3). Після закінчення фільтрації стерильним або обпаленим у вогні пінцетом знімають фільтр і накладають його на середовище Ендо в чашці Петрі так, щоб поверхня з осілими на ній мікробами була звернена вгору (на одну чашку можна поміщати 3-4 мембранних фільтра). Посіви інкубують в термостаті при температурі 37 ° С 18-24 ч.
Другий день дослідження
Чашки з посівами (фільтрами) виймають з термостата. Відсутність підозрілих колоній дає право дати негативну відповідь. Обліку підлягають всі червоні і рожеві колонії з металевим блиском або без нього. З вирослих колоній роблять мазки, фарбують за Грамом (рис. 56).
Мал. 56. Визначення колі-індексу води методом мембранних фільтрів
При наявності грамнегативних паличок ставлять пробу на оксидазу. Позитивна оксидазний проба дає право дати негативну відповідь. При негативній оксидазної пробі проводять посів на напіврідку середу з глюкозою і індикатором або на середу ГПС з бродильними трубками - для виявлення ферментації вуглеводу до кислоти і газу. При наявності кислоти і газу обчислюють колі-індекс. Наприклад, на всіх фільтрах, які перебувають на середовищі Ендо, зросла 3 колонії, пропущено через фільтр було 300 мл води.
Розрахунок. 300 мл - 3 колонії
х = 1; колі-індекс 1
Для відбору проб води використовують спеціально призначену для цих цілей одноразовий посуд або ємності багаторазового застосування, виготовлені з матеріалів, які не впливають на життєдіяльність мікроорганізмів. Ємності повинні бути оснащені щільно закриваються (силіконовими, гумовими або з інших матеріалів) пробками і захисним ковпачком (з алюмінієвої фольги, щільного паперу). Багаторазовий посуд, в тому числі пробки, повинні витримувати стерилізацію сухим жаром або автокла-вірованіем.
Пробу відбирають у стерильні ємності з дотриманням правил стерильності. Ємність відкривають безпосередньо перед відбором, видаляючи пробку разом із стерильним ковпачком. Під час відбору пробка і краю ємності не повинні чогось стосуватися. Обполіскувати посуд забороняється.
При дослідженні води з розподільних мереж відбір проб з крана проводять після попередньої його стерилізації обпаленням і подальшого спуску води не менше 10 хвилин при повністю відкритому крані. Якщо відбирають воду після знезараження хімічними реагентами, то для нейтралізації залишкової кількості дезінфектанту в ємність, призначену для відбору проб, до стерилізації вносять натрій серноватистокислого у вигляді кристалів або концентрованого розчину з розрахунку 10 мг на 500 мл води.
Після наповнення ємність закривають стерильною пробкою і ковпачком. Відібрану пробу маркують і супроводжують актом відбору проб води із зазначенням назвою проби, місця забору, дати (рік, місяць, число, час), мета дослідження, куди направляється проба для дослідження, підпис особи, яка взяла пробу.