Система групи крові резус

Найбільш імуногенним з 5 основних антигенів групи крові системи резус (табл. 18.3) є антиген D. Поширеність антигену D у населення Укаїни - 86% (частка резус-негативних осіб, відповідно, близько 14%). Імуногенність інших (мінорних) антигенів системи резус істотно нижче і убуває в наступному ряду: з> Е> З> е.

Імунна система резус-негативних осіб при контакті з антигеном D синтезує анти-D-антитіла, що клінічно важливо при алогенних гемотрансфузіях і вагітності резус-негативної жінки резус-позитивним плодом (посттрансфузійні гемолитические реакції і гемолітична хвороба новонароджених, відповідно). Залежно від гаплотипу на мембрані еритроцитів зазвичай експресуватися 10000-30000 молекул D, а в деяких випадках і більше.

Для зручності в повсякденній роботі іммуногематологіческіх лабораторій слабкі варіанти антигену D об'єднують в групу D u. частота якої становить близько 1%. Ці еритроцити слабо або взагалі не агглютинируются повними анти-резус антитілами в реакції прямої аглютинації.

Регламентованим є спосіб визначення резус-приналежності з використанням стандартного універсального реагенту антирезус Rh0 (D), первинно негативні зразки додатково досліджуються з використанням стандартного універсального реагенту анти-Rh0 "(DС) і зі стандартною сироваткою Rh0- (DСЕ). Резус-негативними вважають донорів , кров яких не містить жодного з цих трьох антигенів (D, С, Е). Зазначений спосіб ефективно і широко використовувався до розробки діагностикумів на основі моноклональних антитіл.

Реципієнти, які містять антиген D u. повинні бути віднесені до резус-негативним і їм повинна бути перелита тільки резус-негативна кров, так як нормальний антиген D може викликати у таких осіб імунну відповідь.

Особи з антигеном D u кваліфікуються як резус-позитивні донори, так як переливання їх крові може викликати імунну відповідь у резус-негативних реципієнтів, а в разі попередньої сенсибілізації до антигену D - важкі трансфузійні реакції. Тому кров донорів слід обов'язково тестувати на присутність D u.

Резус-приналежність крові хворих встановлюють за наявністю або відсутністю антигену D. Щоб уникнути помилки процедуру взяття крові і визначення резус-приналежності проводять двічі. Визначення мінорних антигенів системи резус, як правило, проводиться при необхідності багаторазових трансфузій в тих випадках, коли в сироватці реципієнта виявлені антитіла до антигенів системи резус, а також у вагітних жінок.

Результат визначення резус-приналежності крові хворих реєструється в спеціальному журналі і на бланку з зазначенням дати і за підписом лікаря, який проводив визначення. Цей бланк вклеюється в історію хвороби із зазначенням дати і підписом лікаря.

Результат визначення резус-приналежності крові донорів реєструється в спеціальному журналі і в донорської карті із зазначенням дати і за підписом лікаря, який проводив визначення.

МЕТОДИ ВИЗНАЧЕННЯ резус-ПРИЛАДДЯ КРОВІ

Реакція гемаглютинації на площині за допомогою анти-D IgМ (повні антитіла) моноклонального реагенту

Визначення проводять в нативної крові, стабілізованої за допомогою консервантів; в крові без антикоагулянту, в т. ч. взятої з пальця. Найбільш чітка реакція аглютинації спостерігається при використанні високої концентрації еритроцитів і температурі близько + 37 ° С, тому бажано використовувати підігріту пластинку.

Хід визначення:

на платівку із змочуваною поверхнею наносять велику краплю (близько 0,1 мл) реагенту;
поруч поміщають маленьку краплю (0,01-0,05 мл) досліджуваної крові;
змішують кров з реагентом скляною паличкою;
через 10-15 с похитують пластинку протягом 20-30 с;
реакція аглютинації починає розвиватися через 10-15 с, чітко виражена крупнолепестковая аглютинація настає через 30-60 с. Результат аглютинації слід враховувати через 3 хв, оскільки з еритроцитами, що несуть антиген D u. реакція аглютинації відбувається повільніше.

Наявність аглютинації свідчить про присутність в досліджуваних еритроцитах антигену D (кров - резус-позитивна). Відсутність аглютинації свідчить про те, що досліджувані еритроцити не містять антигену D (кров - резус-негативна). У разі слабкої аглютинації роблять припущення про наявність на еритроцитах слабкого антигену D і проводять дослідження фенотипу еритроцитів в непрямому антіглобуліновой тесті (непрямій пробі Кумбса) з використанням IgG (неповних) анти-D-антитіл.

відразу ж після визначення записують результати реакції.

Визначення слабких форм антигену D (D u) на другому етапі дослідження реакцією конглютинації з желатином в пробіркових тесті за допомогою анти-D IgG (неповні антитіла) моноклонального реагенту

Паралельно з дослідженням здійснюють постановку трьох контрольних проб:

а) зі стандартними резус-позитивними еритроцитами;
б) зі стандартними резус-негативними еритроцитами;
в) з досліджуваними еритроцитами і розчином желатину, але без анти-D-антитіл.

Хід визначення:

в пробірку вносять одну краплю (0,05 мл) вільних еритроцитів з згустку крові, що згорнулася або еритроцитів, відмитих від консерванту;
додають 2 краплі (0,1 мл) 10% желатину, попередньо прогрітого при 45-50 ° С до розрідження;
додають одну краплю реагенту анти-В;
перемішують суспензію;
инкубируют 10-15 хв на водяній бані або 30 хв в термостаті при 48 ° С;
додають 5-6 мл фізіологічного розчину;
обережно перевертають пробірку 1 - 2 рази;
візуально (неозброєним оком або використовуючи лупу) визначають наявність агглютінати.

Аглютинація еритроцитів свідчить про присутність в них антигену D. У разі чіткої аглютинації в зразку крові, резус-негативної за результатами дослідження за допомогою анти-D IgМ моноклональних антитіл, роблять висновок про наявність антигену D u. У разі нечіткої мелкопесочной аглютинації кров необхідно тестувати в непрямому антіглобуліновой тесті.

Аналогічним чином поряд з моноклональними реагентами можна використовувати стандартні аллоіммунние сироватки з неповними анти-D-антитілами.

При наявності неадекватних результатів контрольних проб визначення резус-приналежності слід повторити з використанням інших реагентів або зразка желатину. При аглютинації досліджуваних еритроцитів желатином за відсутності анти-D-антитіл можна припустити наявність на еритроцитах адсорбованих антиеритроцитарних антитіл анти-резус чи іншої специфічності.

Визначення резус-антигенів за допомогою універсальних реагентів

Стандартний реагент антирезус Rh0 (О) містить поліклональні неповні анти-D-антитіла. Одночасно з дослідженням крові донорів проводиться контрольне дослідження стандартних резус-позитивних еритроцитів тієї ж групи або групи 0 (I) і стандартних резус-негативних еритроцитів обов'язково одногруппной з досліджуваної кров'ю.

Хід визначення:

на дно пробірки вносять 1 краплю стандартного реагенту антнрезус;
додають краплю досліджуваної крові (або еритроцитів);
вміст пробірки перемішують струшуванням;
повільно повертають пробірку, нахиляючи її майже до горизонталі таким чином, щоб вміст розтікався по стінках. Такий розподіл крові по стінках пробірки робить реакцію більш вираженою;
аглютинація настає протягом першої хвилини, але для утворення стійкого комплексу антиген-антитіло і чітко вираженої аглютинації, а також зважаючи на можливість сповільненої реакції при наявності антигену D u. контакт еритроцитів з реагентом при перевертанні слід проводити не менше 3 хв;
для виключення неспецифічної агрегації еритроцитів в пробірку додають 2-3 мл фізіологічного розчину і перемішують, не збовтуючи, шляхом 2-3 -кратного перевертання пробірки;
оцінку здійснюють візуально.

Наявність аглютинації у вигляді великих пластівців з еритроцитів на тлі освітленої рідини свідчить про резус-позитивної приналежності досліджуваної крові.

Відсутність аглютинації (в пробірці гомогенно забарвлена рідина) - ознака резус-негативної приналежності досліджуваної крові.

Результат враховується як істинний після перевірки контрольних зразків, тобто при позитивному результаті зі стандартними резус-позитивними еритроцитами і відсутності аглютинації зі стандартними резус-негативними еритроцитами, одногруппной з досліджуваної кров'ю по системі АВО.

Непрямий антіглобуліновой тест (непряма проба Кумбса) за допомогою (неповних) анти-D-антитіл

Паралельно з дослідженням зразків тестируемой крові проводять контрольне дослідження зі стандартними резус-негативними еритроцитами.

Аглютинація еритроцитів, оброблених протеолітичнимиферментами, IgG (неповними) анти-D-антитілами

Для посилення прямої аглютинації еритроцитів в сольовому середовищі використовують попередню обробку еритроцитів протеазами (протеолітичнимиферментами): бромелін, папайном, трипсином та ін. При цьому підвищується чутливість методу, в тому числі і щодо слабких форм антигену D. Метод використовується в системах автоматизованого визначення груп крові. Особливістю цього тесту, що утрудняє його застосування для рутинного фенотипування еритроцитів, є феномен Прозона - інгібування аглютинації надмірною кількістю антитіл. Для уникнення феномена Прозона необхідно забезпечити стандартність обробки еритроцитів ферментами і строго дотримуватися концентрацію анти-D-антитіл, - рекомендовану виробником.

всього сторінок: 10

Схожі статті

Попередня ◈ Наступна