Лабораторна діагностика гельмінтозів, довідник лікаря
ЛАБОРАТОРНА ДІАГНОСТИКА ГЕЛЬМІНТОЗІВ
Розпізнавання гельмінтозів на підставі клінічних проявів утруднено у зв'язку з спільністю симптомів при багатьох інвазіях - нудота, блювота, біль у животі, нестійкі випорожнення. Важливого значення набувають дані анамнезу про виділення паразитів, члеників деяких гельмінтів. Для підтвердження діагнозу використовують різноманітні методи дослідження. Макроскопічну дослідження застосовують для визначення паразитів, їх члеників. Оскільки дрібні гельмінти важко виявити в екскрементах, користуються таким методом: кал розмішують в десятикратному обсязі води, виливають у високий циліндр, додають 10 мл формаліну (на 1 л вмісту), розмішують і дають відстоятися в витяжній шафі. Після осадження зважених часток надосадову рідину зливають, а осад повторно заливають чистою водопровідною водою до тих, пір поки доливати рідину буде безбарвною. Промитий осад виливають в темний плоский посудину (фотографічні кювети). На темному тлі добре видно дрібні гельмінти (гострики, анкілостоми, карликовий ціп'як та ін.), А також членики стрічкових гельмінтів (свинячого та бичачого ціп'яка).
Будова члеників стрічкових гельмінтів вивчають, поміщаючи їх між двома предметними скельцями. Членики бичачого ціп'яка крупніше члеників свинячого і лентеця широкого, вони мають більше бічних маткових відгалужень, ніж у свинячого ціп'яка, - близько 30 (проти 7-10) (рис. 14, 15).
Членики широкого лентеца короткі, широкі і мають в центрі розетковідное випинання - матку (рис. 16).
Рухливі тільки членики бичачого ціп'яка.
Головка кожного з цестод відрізняється деякими особливостями. Головка свинячого солітера забезпечена чотирма присосками і хоботком з двома рядами крюків (озброєний ціп'як). На голівці бичачого ціп'яка гаки відсутні (неозброєний ціп'як). Головка широкого лентеца має з боків дві ботрии - щілини, за допомогою яких широкий лентец прикріплюється до слизової оболонки кишки (рис. 17, 18, 19).
Для виявлення гельмінтів досліджують випорожнення, перианальную і ректальну слиз, дуоденальне вміст, мокроту, кров і частки тканин. Важливе значення в мікрогельмінтологіческіх дослідженнях має овоскопія, яка дає можливість поставити діагноз за формою яєць при мікроскопії препаратів з калу, жовчі. Деякі гельмінти локалізуються поза кишок (цистицерк, трихінели, ехінокок). У цих випадках для діагностики використовують імунологічні методи дослідження, біопсію і ін.
При мікроскопії необхідно брати свіжі випорожнення або консервувати їх в 5% розчині формаліну, щоб уникнути висихання калу, при якому змінюється форма яєць і утруднюється правильна діагностика.
Досліджують їх мікроскопією нативного мазка, після збагачення - методом Фюллеборна, Телеманії і ін.
Для приготування нативного препарату невелику частину фекалій беруть з різних ділянок доставленої порції, ретельно розтирають на предметному склі в краплі фізіологічного розчину хлориду натрію або 50% розчину гліцерину. Препарат накривають покривним склом і дивляться під мікроскопом (не менше 2 препаратів).
Метод Шульмана (нативний препарат) має певні переваги. За допомогою цього методу можна визначати яйця і личинки деяких гельмінтів. Для цього в скляну посудину з водою або фізіологічним розчином хлориду натрію (150 мл) занурюють 3 г фекалій. Скляною паличкою розмішують вміст посудини, в результаті чого в центрі, у палички, утворюється воронковидное поглиблення. Швидко витягають паличку і залишилася в ній краплю рідини наносять на предметне скло, накривають покривним склом і розглядають під мікроскопом, визначаючи яйця гельмінтів і личинки.
Метод зіскрібка застосовують для діагностики ентеробіозу, тениоза і тениаринхоза. Користуються відточеною у вигляді шпателя сірником, загострений кінець якої змочений в 1% розчині соди. Вміст шпателя переносять на предметне скло в краплю 1% розчину бікарбонату натрію. Зверху краплю накривають покривним склом і розглядають під мікроскопом.
Метод Фюллеборна дозволяє концентрувати яйця гельмінтів для дослідження, і тому ймовірність виявлення їх цим способом збільшується. Готують розчин хлориду натрію - 350 г на 1 л води, нагрівають до кипіння і фільтрують через шар вати або марлі. У фарфоровий стаканчик на 100 мл вносять 5 10 г калу і поступово розбавляють насиченим розчином натрію хлориду. Клітковину, яка спливає, негайно видаляють фільтрувальної папером. Стаканчик з вмістом залишають у витяжній шафі на 30 хв 1ч, на поверхні утворюється плівка, в якій знаходяться яйця гельмінтів, спливли в гіпертонічному розчині. Дротиком або платинової петлею знімають плівку, наносять на предметне скло, накривають покривним і досліджують. Методом Фюллеборна добре визначають яйця всіх круглих гельмінтів, крім незапліднених яєць аскарид, і карликового ціп'яка. Яйця сосальщиков і великих стрічкових гельмінтів спливають погано, тому доцільно переглядати 2-4 препарату з дна посудини.
Для накопичення яєць за методом Телеманії необхідні ефір і соляна кислота. У пробірку наливають 1-1,5 мл ефіру і 5-6 мл розведеної соляної кислоти, до розчину. додають невелику частину екскрементів (1-2 г), збовтують, проціджують через густе сито в порцелянову чашечку, зливають в центрифужную пробірку і центрифугують 1 хв. У пробірці утворюється три шари: верхній містить екстраговані жири, середній - соляну кислоту, в якій розчинилися білкові речовини, і нижній - нерозчинені частинки і яйця гельмінтів. Два верхніх шару зливають і з осаду готують 1-2 препарату, які розглядають під мікроскопом. Недоліком методу є шкідлива дія соляної кислоти на оптичну систему мікроскопа і деформуючий вплив її на яйця гельмінтів.
За способом Калантаром н 5 г фекалій розмішують в 10-кратному обсязі насиченого розчину нітрату натрію. Отриману емульсію проціджують через рідкісну марлю. Через 10 хв готують 5-6 препаратів з плівки з поверхні рідини і досліджують їх під мікроскопом.
При описторхозе для визначення інтенсивності інвазії і ефективності проведеної терапії застосовують метод кількісного визначення яєць в калі по Столл. З цією метою в спеціальну скляну колбу наливають 56 мл децинормального розчину їдкого натру. Додають 4 г калу (до рівня рідини в колбі 60 мл) і збовтують зі скляними бусами. Для дослідження піпеткою набирають 0,075 мл (0,005 г) суміші, переносячи на предметне скло, накривають покривним склом (22 х 23 мм) і під мікроскопом вважають кількість яєць (що містяться в 0,075 см3 суміші). Отримане число множать на 200, в результаті отримують число яєць в 1 г калу. Нижче наводимо коротку характеристику яєць гельмінтів.
Запліднене яйце аскариди овальної форми з товстою багатошаровою оболонкою. Зовнішня білкова оболонка крупногорбиста, пофарбована в темно-жовтий колір. Всередині яйця кулястий бластомер. Розміри яйця 50-70х40-50 мкм. Неоплодотворенное яйце аскарид подовженої форми, білкова оболонка тонка, мелкобугристая, жовтого кольору. Всередині яйця великі полігональні жовті клітини. Розміри 50-100х40- 50 мкм. Іноді яйця можуть бути без білкової оболонки - прозорі, безбарвні і покриті рівною товстою оболонкою (рис. 20, 1, 2, 3).
Яйця власоглава овальної форми з товстою багатошаровою оболонкою золотисто-жовтого або коричневого кольору. На полюсах - пробковидне освіти. Всередині яйця - дрібнозернистий вміст. Розміри 50 54х22-23 мкм (рис. 20, 4).
Яйця гостриків неправильної овальної форми з тонкою гладкою безбарвною багатошаровою оболонкою. Одна сторона уплощена, інша - опукла. Всередині яйця - зародок на різних рівнях розвитку, аж до личинки. Розміри 50-60х20-30 мкм (рис. 20, 5).
Яйця анкілостом правильної овальної форми з тонкою прозорою безбарвною оболонкою. Усередині свежеви-ділених яєць - 4 бластомера. Розміри 54-70х36- 40 мкм (рис. 20,6).
Яйця бичачого і свинячого ціп'яка однакового будови, кулястої форми; оболонка з 1-2 нитками. Всередині яйця онкосфера (зародок) з товстої радіально покресленої оболонкою темно-коричневого кольору, з шістьма ембріональними гачками всередині. Розміри онкосфери 31х40 мкм. У випорожненнях людини зустрічаються не яйця, а онкосфери (рис. 20, 7).
Яйця карликового ціп'яка овальної форми, мають тонку безбарвну оболонку з лімоноподобной онкосфера всередині, від полюсів якої відходять довгі ниткоподібні придатки (філаменти). Розміри 40х50 мкм. У онкосфера 6 зародкових крючечків (рис. 20,8).
Яйця широкого лентеца яйцевидної форми з товстої гладкою сірого кольору оболонкою. Всередині яйця крупнозернистое вміст, на верхньому полюсі - кришечка, на протилежному - горбок. Розміри 68-71х45 мкм (рис. 20, 9).
Яйця котячої двуустки мають тонку гладку оболонку блідо-жовтого кольору з кришечкою на верхньому полюсі і шипиком на протилежному. Нижня половина яйця розширена, внутрішній вміст яйця дрібнозернистий. Розміри 26-32X11-15 мкм.
Для виявлення личинок анкілостоми, угріци кишкової користуються методом Бермана. 5 г фекалій на металевому ситі поміщають над скляною лійкою, прикріпленою до штатива. На носик воронки одягають гумову трубку з затискачем. У воронку наливають нагріту до 50 ° С воду так, щоб нижня частина сита з фекаліями була наближена до води. Личинки активно переходять з калу в воду, збираючи в нижній частині гумової трубки. Через 2 год повільно відкривають зажим, спускають воду з личинками в центрифужні пробірки, центрифугують, з осаду на предметному склі готують препарати, які розглядають під покривним склом.
Для визначення в крові личинок трихінел взяту з вени кров гемолізує дистильованою водою, центрифугують і з осаду готують препарати, які досліджують під мікроскопом.
Дослідження дуоденального вмісту проводять так: жовч змішують з рівним об'ємом етилового ефіру, центрифугують; осад микроскопируют. Крім осаду, досліджують плаваючі в рідині пластівці, в яких можуть бути яйця гельмінтів.
При ехінококозі, аскаридозі досліджують мокроту для виявлення личинок або дорослих особин. Мокротиння розтирають на скляній пластинці, щільно накривають другою платівкою і розглядають неозброєним оком на світлому і чорному тлі, а також під лупою в прохідному світлі. Одночасно окремі шматочки мокротиння ( «іржаві», обривки тканин) наносять тонким шаром на предметне скло, щільно накривають покривним і оглядають при малому і великому збільшенні мікроскопа. Таким способом можуть бути виявлені яйця паразитів, гаки ехінокока, личинки аскарид.
При цистицеркозі і трихінельоз досліджують також тканини. Шматочок біопсірованной тканини - м'язи підшкірної клітковини, шкіри - оглядають спочатку неозброєним оком для визначення бульбашки-цистицерка, довжина якого 6-20 мм, ширина - 5-10 мм. При підозрі на цистицерк бульбашка розчавлюють між двома предметними скельцями і розглядають під мікроскопом. Для цистицеркоза характерна наявність сколекса з чотирма присосками і віночком гаків.
Щоб виявити трихінели, асептически вирізаний шматочок м'язи (литкового і ін.) Подрібнюють в 50% розчині гліцерину на тонкі волокна за допомогою препаровальной голок. Ці волоконця здавлюють між двома предметними скельцями і досліджують при малому збільшенні мікроскопа в затемненому полі зору. Личинки трихінел згорнуті в м'язах у вигляді спіралі і знаходяться в капсулах (рис. 21).
Дослідження м'язів на трихінели рекомендується проводити не раніше ніж на 8-й день хвороби.
Рентгенологічний метод дослідження застосовують при ехінококозі, ціетіцеркозе, трихінельоз (після звапніння личинок) та аскаридозі.
У ряді випадків використовують імунологічні методи діагностики.
Гельмінти, а також продукти їх життєдіяльності мають антигенними властивостями для організму людини. В результаті перебування гельмінтів в організмі людини відбувається алергічна перебудова, яка може бути виявлена спеціальними внутрішньошкірним алергічними пробами. Крім того, в організмі інвазованих утворюються різні антитіла - комплементсвязивающіе преціпітіни. Методи иммунодиагностики набувають особливої цінності в тих випадках, коли не може бути використана овоскопія, зокрема при трихінельозі, ехінококозі, цистицеркозі, аскаридозі в міграційній стадії і при інвазії тільки чоловічими особинами.
При ехінококозі і трихінельоз ставлять реакцію латекс-аглютинації, Калюсі, цистицеркозі - пробу з антигеном, приготованим Бобровим і метушня. При деяких гельмінтозах можливе застосування серологічних досліджень: реакція преципітації личинок аскарид з сироваткою крові хворого в міграційній стадії аскаридозу, реакція преципітації сироватки крові хворого на трихінельоз з антигеном з личинок трихінел, РСК при ехінококозі, трихінельоз, опісторхоз, цистицеркозі.