Рекомбінантні суб'едінічние вакцини
Рекомбінантні суб'едінічние вакцини
Прогрес в області отримання великої кількості протективний вірусних антигенів досягнутий завдяки використанню технології рекомбінантної ДНК.
Рекомбінантні суб'едінічние вакцини готують з очищених вірусних білків, експрессіруемих клонованими вірусними генами. Гени, що кодують протективного антигени, вводять в відповідну плазміду, яку клонують в Експресується клітинну систему. Використовуваними еукариотическими системами експресії є дріжджі, клітини комах і клітини різних ссавців. Перевагою дріжджів є можливість великомасштабного вирощування. Першою вакциною, приготовленою експресією клонованого гена в дріжджах, була вакцина проти гепатиту В людини.
Якщо імуногенний вірусний білок повинен бути в глікозильованого формі, необхідно використовувати еукаріотичну Експресується систему. Експресуватися таким чином білок є глікозильованим і має відповідну конформацию. Продукція вірусних білків в прокариотической системі була менш успішною [958].
Перевага клітин комах полягає в простій технології, пов'язаної з культурами клітин метелика (або гусениці), яке здатне дати велику кількість вірусного білка в результаті інфікування бакуловірусів, що несуть ген (гени) протективного білка (білків) цікавить вірусу. Промотор гена, що кодує білок бакуловірусної поліедроза, є настільки сильним, що продукт цікавить вірусного гена, введений всередину гена бакуловірусної поліедрину, може становити половину всього протеїну інфікованих клітин молі або гусениці.
Перевага клітин ссавців у порівнянні з клітинами нижчих еукаріотів полягає в тому, що в них більш точно (правильно) здійснюється посттрансляційних процесинг, включаючи гликозилирование і секрецію вірусних білків.
При виборі клітинної системи для експресії рекомбінантних вірусних антигенів важливу роль відіграють такі критерії, як ефективність, безпеку і технологічність. Перш за все необхідно визначити ідентичність експрессіруемого протективного антигену і економічну доцільність його виробництва. У разі використання перевіваемих ліній клітин, необхідно, щоб експрессіруемий вірусний білок легко відокремлювався від клітинної ДНК через її можливої онкогенної небезпеки. Секреція вірусних глікопротеїнів в середу полегшує їх очищення, яка не повинна супроводжуватися порушенням конформації нейтралізують епітопів. Необхідно також визначити доцільність додавання ад'юванта з метою посилення імуногенності очищеного білка.
У прокариотической системі E.coli були експресувати капсидний білок VP1 вірусу ящура, поверхневий антиген вірусу гепатиту В, гемаглютинін вірусу грипу А, поверхневий глікопротеїн G вірусу сказу, глікопротеїн D вірусу простого герпесу і білки, які кодуються різними сегментами генома ротавірусу [1131]. Кількість рекомбінантного білка VP1 вірусу ящура, синтезованого в E.coli, досягало 17% від загальної маси білка. Такий білок в поєднанні з ад'ювантом викликав імунітет у тварин [222, 1131, 1219].
Глікопротеїн D вірусу простого герпесу, експресуватися в E.coli в неглі- козілірованном вигляді, викликав освіту нейтралізують антитіл у кроликів. Це вказувало на те, що гликозилирование поверхневих вірусних глікопротеїнів даного вірусу не є необхідною умовою для вироблення нейтралізуючих антитіл. Однак неглікозильовані білок гемаглютиніну вірусу грипу А, синтезований в тій же системі, не викликав у кроликів і мишей антитіл, що нейтралізують вірус, або затримку гемаглютинації. Глікопротеїн вірусу сказу, отриманий подібним способом, що не був гліколізірованного і, незважаючи наполноразмерность, що не індукував імунітету мишей [один тисячу сто тридцять одна].
Рекомбінантний глікопротеїн Е і неструктурний білок NS-1 вірусу японського енцефаліту, синтезовані в E.coli і посилені ад'ювантом, викликали освіту ВН-антитіл і стійкість до зараження у мишей після чотириразового введення [1443]. Рекомбінантний білок, представлений С-кінцевою частиною глікопротеїну Е і N-кінцевою частиною NS-1 вірусу денге, експресуватися в E.coli, захищав мишей від летальної інфекції гомологічним вірусом [тисячі чотиреста сорок два]. Згодовування мишам рекомбінантних сальмонел, що експресують антигени вірусу гепатиту В, супроводжувалося утворенням специфічних антитіл у високому титрі [одна тисяча триста вісімдесят два]. Можливо, це був перший крок на шляху створення ентеральної вакцини проти гепатиту В та інших вірусних хвороб.
Незважаючи на окремі позитивні результати при використанні прокариотической системи експресії, виник ряд проблем, основними з яких з'явилися низький вихід і агрегація рекомбінантного білка [1167].