Реакція аглютинації (ра), механізм і методи постановки

Реакція аглютинації - це склеювання і випадання в осад мікробних або інших клітин (еритроцитів) під дією антитіл в присутності електроліту. Відомий ефект реакції (феномен аглютинації) - утворення осаду, який називається агглютінати.

Цю реакцію використовують для серодиагностики і сероідентіфікаціі. РА використовують для серодиагностики (виявлення антитіл в сироватці крові хворих) черевного тифу і паратифів (реакція Відаля), бруцельозу (реакція Райта), туляремії та лептоспірозу. РА використовують для сероідентіфікаціі (визначення виду збудника, виділеного від хворого) при кишкових інфекціях, кашлюку, холері та ін.

1. Антиген (агглютиноген) - це цілі (не руйнування) мікробні або інші клітини (корпускулярний. Нерозчинний антиген). Агглютіногени - це суспензія живих або убитих мікробних клітин або інших будь-яких клітин. Антигени можуть бути як невідомими, так і відомими. Невідомий агглютиноген - це мікробна культура, виділена з організму хворого, яку необхідно визначити. Відомий антиген - діагностикум - діагностичний препарат - суспензія вбитих мікробів відомого виду в фізіологічному розчині. Ця суспензія каламутна (непрозора), тому що мікробні клітини не розчиняються, а залишаються цілими. Відомий агглютиноген буде використовуватися для виявлення невідомих антитіл в сироватці крові хворих.

2. Антитіло (агглютинин) - знаходиться в сироватці крові. Антитіла також можуть бути як невідомими, так і відомими. Невідомі антитіла, які потрібно визначити, знаходяться в сироватці крові хворої людини. Відомі антитіла знаходяться в імунних діагностичних сироватках. які називаються аглютинативна сироватками. Вони використовуються для сероідентіфікаціі, тобто для визначення невідомого антигена - виду мікробної культури.

3. Електроліт - 0,9% розчин хлориду натрію.

Способи постановки РА.

1. Орієнтовна (пластинчаста) РА - проводиться на склі. На предметне скло наносять 2 краплі сироватки і 1 краплю ізотонічного розчину. В одну з крапель сироватки і в краплю ізотонічного розчину петлею вносять мікробну культуру і перемішують. Крапля ізотонічного розчину з мікробами - контроль антигену. крапля сироватки без мікробів - контроль антитіла. крапля сироватки з мікробами - досвід. Якщо в сироватці є антитіла, відповідні мікробним антигенів, які з нею поєднуються, то антитіла і антигени будуть специфічно зв'язуватися один з одним і через 1 - 3 хв у дослідній краплі з'являться пластівці агглютіната. Контроль антигена повинен бути мутним, а контроль антитіла - прозорим. Облік результатів реакції проводиться по появі пластівців агглютіната. Якщо випадають пластівці - реакція позитивна, тобто антиген відповідає антитілу і по антигену можна визначити антитіло або навпаки. Якщо залишається помутніння - реакція негативна.

2. Розгорнута реакція аглютинації - проводиться в пробірках. Спочатку готують 2-разового розведення сироватки крові хворої людини від 1:50 до 1 1600. У 6 пробірок наливають по 1 мл ізотонічного розчину хлориду натрію. В першу пробірку вносять 1 мл сироватки крові хворого в розведенні 1:50, перемішують і отримують розведення 1: 100, потім 1 мл розведення 1: 100 переносять у другу пробірку і отримують розведення 1: 200 і т.д. Дві пробірки залишають для контролю антигену та сироватки. У контроль сироватки додають тільки сироватку в розведенні 1:50, в контроль антигену - тільки антиген. У всі інші пробірки додають 0,1 мл антигену - діагностикумів (О або Н) і ставлять все пробірки в термостат при 37 ° С на 18-20 годин. Облік результатів реакції проводять за характером, кількістю утвореного осаду (агглютіната) і ступеня каламутності. Облік проводять тільки при наступних результатах в контролях: контроль сироватки - прозорий, контроль антигену - каламутний. О-антитіла дають дрібнозернистий осад. Н-антитіла - крупнозернистий. За останньою пробірці, в якій ще видно реакція аглютинації, встановлюють діагностичний титр.

При серодіагностики захворювань важливо не просто виявити специфічні антитіла до певного збудника, але і виявити їх кількість, тобто встановити такий титр антитіл, коли можна говорити про наявність захворювання, викликаного цим збудником. Цей титр і називається діагностичним титром. Наприклад, для діагностики черевного тифу потрібно виявити титр антитіл - 1: 400, але не менше. Ще більш точні результати дає виявлення наростання антитіл в парних сиворотках.Сиворотку хворого відбирають на початку захворювання і через 3 - 5 або більше днів. Якщо титр антитіл зростає не менше, ніж в 4 рази, отже, можна говорити про поточний захворюванні.

Якщо розгорнута реакція аглютинації ставиться для сероідентіфікаціі, то використовують агглютинирующие діагностичні сироватки, розведені до титру або до половини їх титру. РА вважається позитивною, якщо аглютинація виявляється в розведенні, близькому до титру діагностичної сироватки.