Поняття про культурні, ферментативних ітинкторіальних властивості мікробів - загальна мікробіологія
Бактеріологічне дослідження, що застосовується для виявлення патогенних бактерій в матеріалі від хворих тварин або їх трупів, виявлення мікробів в об'єктах зовнішнього середовища, кормах, м'ясі і т. Д. Характер і методика взяття проб, спосіб пересилання матеріалу при різних інфекційних хворобах неоднакові, але існують загальні положення, які необхідно враховувати незалежно від об'єкта дослідження і властивостей матеріалу. Досліджуваний матеріал по можливості збирають в асептичних умовах в стерильну посуд і доставляють в найближчим часом з супровідним документом в лабораторію (в ньому вказані дата взяття, характер і джерело матеріалу, основні клінічні ознаки хвороби і патологоанатомічні зміни, мета дослідження). Бактеріологічне дослідження включає 3 основні методи: мікроскопію (бактеріоскопію) мазків з Патол. або ін. досліджуваного матеріалу; виділення чистої культури бактерій з наступним вивченням морфологич. культурально-біохімічн. антигенних і патогенних властивостей бактерій.
Бактеріологічне дослідження починають з мікроскопії, що дозволяє виявити в матеріалі мікробів, вивчити їх морфологію (форму, розмір, будова). При мікроскопії Патол. матеріалу готують мазки-відбитки з органів, тканин або тонкі мазки з ін. досліджуваного матеріалу, висушують їх на повітрі, фіксують (частіше фламбирования) і забарвлюють тим чи іншим методом в залежності від спрямованості дослідження. Для виявлення деяких бактерій (напр. Збудника туберкульозу) Патол. матеріал попередньо обробляють одним з методів збагачення, щоб підвищити в ньому концентрацію бактерій і позбутися від сторонніх мікробів. Для прискореного виявлення бактерії застосовують люмінесцентну мікроскопію. Для вивчення рухливості бактерій, обумовленою наявністю джгутиків, використовують мікроскопію молодий (12--24 ч) живої культури за допомогою препаратів висячої краплі або роздавленої краплі. Рухливість бактерій може бути встановлена також на основі особливостей росту культури в напіврідкому МПА.
Виділення культури бактерій проводять шляхом посіву матеріалу на живильні середовища. Щоб полегшити і прискорити виділення бактерій, використовують диференційно-діагностичні та елективні питати. середовища (щільні і рідкі), на яких брало певні види бактерій дають характерний для них зростання (при цьому затримується ріст сторонніх мікробів). Посів на щільні питати. середовища в бактеріол. чашках проводять шляхом розтирання шпателем декількох крапель матеріалу по поверхні середовища. При дослідженні паренхіматозних органів убитих або загиблих тварин обпалюють або фламбіруйте шматочок органу, потім надрізають його стерильними ножицями і за допомогою пінцета проводять надрізаної поверхнею по питати. середовищі в чашці. У рідку середу посів матеріалу роблять пастерівської піпеткою. Щоб отримати зростання ізольованих колоній мікробів на щільному середовищі і відокремити досліджувані бактерії від супутніх мікроорганізмів, проводять дрібний посів за методом Дрігальского. Засіяні чашки і пробірки інкубують в термостаті при оптимальній для зростання кожного виду бактерій темп-ре (частіше 37 ° С) протягом 1-2 діб, в деяких випадках (туберкульозні бактерії) - до 3-4 тижнів. Найбільш тривалий і складний етап Б. і .-- родова і видова ідентифікація виділених культур. Вивчають тільки чисті культури, отримані після пересіву з однієї колонії і мають ідентичні морфологич. і тинкторіальних властивості. Антигенні властивості культури вивчають в реакції аглютинації. Визначення патогенних властивостей бактерій проводять шляхом зараження лабораторних тварин культурою або фільтратом культури (при визначенні токсінообразованія).
Після вивчення властивостей бактерій зіставляють отримані дані з ознаками бактерій, наявними в класифікаційних схемах або визначниках мікробів (Д. Берджи, 1974; Н. А. Кра-сілишков, 1949, і ін.), І проводять їх родову і видову диференціацію. У сумнівних випадках проводять повторне дослідження матеріалу. Результати Б. і. записують в реєстраційний журнал або на бланку лабораторної експертизи, в ув'язненні до-рій вказують, який мікроб виділений з досліджуваного матеріалу. Діагноз на інфекційну хворобу може бути поставлений тільки при обліку епізоотологіч. клинич. і патологоанатоміч. даних.
КУЛЬТУРА МІКРООРГАНІЗМІВ, популяція клітин мікроорганізмів (бактерії, дріжджі, актиноміцети, цвілеві гриби), вирощена в рідкому або на щільному поживному середовищі. Розрізняють чисту і змішану культури. Якщо на живильному середовищі виростають мікроорганізми одного виду, то така культура називається чистою; при наявності росту мікробів двох або більшого числа видів - змішаної. Чистоту культури визначають шляхом мікроскопії мазків, приготовлених з культур в рідкому і на щільною середовищах, враховуючи при цьому однотипність колоній на щільному середовищі, а також на основі вивчення культуральних, біохімічних і антигенних властивостей мікроорганізмів.
Культура бактеріальна - популяція життєздатних бактерій, вирощених на питати. середовищі. Чистий культура бактерій, виділена з до.-л. джерела в певний час, наз. штамом. Найбільш типові штами, що володіють характерними физиол. і біол. властивостями, властивими даному виду бактерій, наз. еталонними і використовуються для порівняння з ними знову виділених культур. Ідентифікація та диференціація бактерій можуть бути проведені лише в тому випадку, коли є чиста культура. Тому при отриманні змішаної культури вдаються до різних методів очищення її від сторонніх мікробів. Еталонні штами застосовують у виробництві діагностичних і імунних препаратів (для виготовлення антигенів, отримання сироваток, вакцин, антитоксинів). Для тривалого зберігання культури бактерій частіше використовують напіврідкий (0,25--0,3%) МПА (до отриманої культурі додають шар стерильного вазелінового масла), мясопептонний печінковий бульйон з вазеліновим маслом і ін. Найбільш надійна збереження культур досягається при їх ліофіль-ном висушуванні. Правила зберігання культури бактерій і порядок їх відпустки в установи визначені спеціальною інструкцією. На кожен штам бактерій заповнюється паспорт, в якому вказують час і джерело виділення культури, властивості і особливості штаму.
Тинкторіальні властивості - властивості бактерій, грибів і найпростіших, що характеризують їх здатність вступати в реакцію з барвниками і фарбуватися певним чином.
Бактерії мають різноманітну форму і досить складну структуру, визначальну різноманіття їх функціональної діяльності. Для бактерій характерні чотири основні форми: сферична (куляста), циліндрична (паличкоподібна), звита і ниткоподібна. Бактерії кулястої форми - коки - в залежності від площини поділу і розташування відносно один одного окремих особин підрозділяються на мікрококи (окремо що лежать коки), диплококки (парні коки), стрептококи (ланцюжки коків), стафілококи (мають вигляд виноградних грон), тетракоккі (освіти з чотирьох коків) та сарціни (пакети з 8 або 16 коків) .Палочковідние бактерії розташовуються у вигляді поодиноких клітин, дипло- або стрептобактерій.Ізвітие форми бактерій - вібріони і спірили, а також спірохети. Вібріони мають вигляд злегка вигнутих паличок, спірили - звиту форму з декількома спіральними завіткамі.окраскі мікроорганізмів використовують основні барвники, які більш інтенсивно зв'язуються кислими компонентами клітини. З сухих барвників, що продаються у вигляді порошків, готують насичені спиртові розчини, а з них - водно-спиртові, які і служать для фарбування мікробних клітин. Мікроорганізми фарбують, наливаючи барвник на поверхню мазка на певний час. Забарвлення основним фуксином ведуть протягом 2 хв, метиленовим синім - 5-7 хв. Потім мазок промивають водою до тих пір, поки що стікають струменя води не стануть безбарвними, висушують обережним промоканием фільтрувальної папером і проводять мікроскопію в иммерсионной системі. Якщо мазок правильно пофарбований і промитий, то поле зору абсолютно прозоро, а клітини інтенсивно пофарбовані.
Існують кілька основних забарвлень: по Граму, за Цілем-Нільсеном, по Ауєскі, Нейссера, Бурі-Гінса.
Ферментативні властивості бактерій обумовлені набором ферментів, відображають певні умови харчування і обміну речовин, властиві даному виду мікроорганізмів в тих чи інших умовах зовнішнього середовища. Бактерії роду Salmonella характеризуються такими ферментативними властивостями: чи не розріджують желатину, розкладають адоніта і не ферментують сахарозу; переважна більшість не розщеплює салицина і не розкладає лактозу, не утворює індолу, що не розщеплює сечовину, не дає реакції Фогес-Проскауера (реакція на ацетілметілкар-бінол); ферментує (за невеликим винятком мальтозу, маніт, сорбіт, розщеплює глюкозу з утворенням газу (S. typhi, S. pullorum зазвичай не утворюють газу); дає позитивну реакцію з метиловим червоним, утилізує амоній і редукує нітрати; більшість з них продукує сірководень.
Для вивчення ферментативних властивостей бактерій роду Salmonella зазвичай використовують короткий кольоровий (строкатий) ряд, що складається з середовищ з глюкозою, манітом, арабінозою, дульцітом, рамнозою (середа Біттера); гліцерінофуксіновий бульйон (бульйон Штерна). Крім зазначених середовищ для диференціації серологічних типів сальмонел використовують також середовища з мальтозою, інозитом, трегалозу, ксилозой; лакмусовое молоко (зміна лакмусового молока при зростанні сальмонел дозволяє їх диференціювати за здатністю утворювати кислоту або луг). Замість лакмусового можна використовувати знежирене молоко з індикатором бромтимоловим синім (1 мл 0,4% -ного розчину в 100 мл молока). Відоме значення для диференціації сальмонел має освіту сірководню культурою. Протеолітичні властивості досліджують шляхом посіву досліджуваної культури сальмонел на МТЖ і молоко.
З огляду на схожість бактерій роду Salmonella з іншими мікроорганізмами родини Enterobacteriaceae виникає необхідність їх диференціації. В даний час в бактеріологічній практиці широко використовують щільні диференційно-діагностичні поживні середовища з лактозою (середовища Плоскірєва, Ендо, Левіна). За здатністю бактерій ферментувати лактозу гальмонелли відрізняють від часто супутньої Е. сон, тому при дослідженні матеріалу на сальмонели спочатку проводять висів на одну з диференційно середовищ. На цих середовищах E. coli, ферментують лактозу з утворенням кислоти і зміною і пета індикатора, утворює колонії, що відрізняються по цисту від колоній сальмонел, що не ферментують лактозу. На середовищі Ендо бактерії E. coli дають колонії червоного кольору, часто з металевим блиском, сальмонелли- безбарвні або блідо-рожеві (пофарбовані в колір середовища); на середовищі Плоскірєва E. coli - колонії оранжево-червоного кольору, сальмонели - прозорі пли ніжно-рожеві; на середовищі Левіна E. coli формують колонії чорного кольору, оточені обідком, сальмонелли- прозорі, ніжно-рожеві або рожево-фіолетові. Для диференціації сальмонел і культурально подібних штамів, а також бактерій роду Proteus і бактерій групи кишкових паличок застосовують середовища з сечовиною (середа Прейс, Ресселя, Олькеницкого), SS-arap (Salmonella - Shigella - агар) і ін. Колір цих середовищ обумовлений неоднаковою інтенсивністю розщеплення мікроорганізмами азотистих речовин з утворенням лужних продуктів. Бактерії групи кишкових паличок і Proteus (за винятком 0-форми), як правило, на SS-arape не дають зростання, а сальмонели ростуть у вигляді ніжних, безбарвних колоній.
Щільні диференційно-діагностичні середовища служать лише для визначення приналежності бактерій до роду Salmonella і відділення їх від супутньої мікрофлори.
Для найбільш ефективного виділення сальмонел з патологічного матеріалу, що містить велику (кількість супутньої мікрофлори, що перешкоджає їх росту, використовують спеціальні середовища збагачення (Мюллера, Кауфмана та ін.). Тетратіоновий натрій, що додається в середу Мюллера, пригнічує ріст бактерій групи кишкових паличок, але не перешкоджає розвитку сальмонел. З-поміж Кауфмана є модифікованою середу Мюллера, до якої додані зеленка і натуральна бичача жовч. Ці компоненти затримують ро ст бактерій групи кишкових паличок і особливо протеуса, але сприяють зростанню сальмонел.
Ферментативні властивості сальмонел не завжди стабільні і можуть змінюватися в залежності від умов зовнішнього середовища, тому правильне тіпізірованія сальмонел можливо лише в результаті вивчення комплексу морфологічних, культуральних, ферментативних властивостей і антигенної структури.