Персональний сайт - хімія білків кольорові реакції
Кольорові реакції застосовуються для встановлення білкової природи речовини, ідентифікації білків і визначення їх амінокислотного складу в різних біологічних рідинах. В клінічній лабораторній практиці ці методи використовуються для визначення кількості білка в плазмі крові, амінокислот в сечі і крові, для виявлення спадкових або набутих порушень обміну речовин у новонароджених.
Реакція №1 «Біуретова реакція на пептидний зв'язок»
Принцип: в основі биуретовой реакції лежить здатність пептидних зв'язків (-СО- NH -) утворювати з сульфатом міді в лужному середовищі забарвлені комплексні сполуки, інтенсивність забарвлення яких залежить від довжини поліпептидного ланцюга. Розчин білка дає синьо-фіолетове забарвлення.
Реактиви: 1) яєчний білок, 1% розчин (білок курячого яйця фільтрують через марлю і розводять дистильованою водою 1:10); 2) гідроокис натрію, 10% розчин; 3) сульфат міді, 1% розчин.
Хід визначення: в пробірку вносять 5 крапель розчину яєчного білка, 3 краплі гідроксиду натрію і 1 краплю сульфату міді, перемішують. Вміст пробірки набуває синьо-фіолетове забарвлення.
Реакція №2 «Нінгідринова реакція»
Принцип: сутність реакції полягає в утворенні сполуки, пофарбованого в синьо-фіолетовий колір, що складається з нингидрина і продуктів гідролізу амінокислот. Ця реакція характерна для аміногруп в α-положенні, які присутні в природних амінокислотах і білках.
Реактиви: 1) яєчний білок, 1% розчин; 2) нингидрин, 0,5% водний розчин.
Хід визначення: в пробірку вносять 5 крапель розчину яєчного білка, додають 5 крапель розчину нингидрина і нагрівають до кипіння. Розвивається рожево-фіолетове забарвлення, що переходить з плином часу в синьо-фіолетове.
Реакція №3 «Ксантопротеиновая реакція»
Принцип: при додаванні до розчину білка концентрованої азотної кислоти і нагріванні з'являється жовте забарвлення, яке в присутності лугу переходить в оранжеве. Суть реакції полягає в нитровании бензольного кільця циклічних амінокислот азотною кислотою з утворенням нітросполук, що випадають в осад. Реакція виявляє наявність в білку циклічних амінокислот (фенілаланін, тирозин, триптофан).
Реактиви: 1) яєчний білок, 1% розчин; 2) концентрована азотна кислота; 3) гідроокис натрію, 10% розчин.
Хід визначення: до 5 крапель розчину яєчного білка додають 3 краплі азотної кислоти і (обережно!) Нагрівають. З'являється осад жовтого кольору. Після охолодження додають (бажано на осад) 10 крапель розчину гідроксиду натрію, з'являється оранжеве забарвлення.
Реакція №4 «Реакція Адамкевича»
Принцип: амінокислота триптофан в кислому середовищі, взаємодіючи з альдегідами кислот, утворює продукти конденсації червоно-фіолетового кольору.
Реактиви: 1) нерозбавлений яєчний білок; 2) концентрована (крижана) оцтова кислота; 3) концентрована сірчана кислота.
Хід визначення: до однієї краплі білка додають 10 крапель оцтової кислоти. Нахиливши пробірку, обережно по стінці додають краплями близько 0,5 мл сірчаної кислоти так, щоб рідини не змішувалися. При стоянні пробірки на кордоні рідин з'являється червоно-фіолетове кільце.
Реакція №5 «Реакція Фоля»
Принцип: амінокислоти, що містять сульфгідрильні групи - SH. піддаються лужному гідролізу з утворенням сульфіду натрію Na 2 S. Останній, взаємодіючи з плюмбітом натрію (утворюється в ході реакції між ацетатом свинцю і гідроксидом натрію), утворює осад сульфіду свинцю PbS чорного або бурого кольору.
Реактиви: 1) яєчний білок, 1% розчин; 2) реактив Фоля (до 5% розчину ацетату свинцю додають рівний об'єм 30% розчину гідроксиду натрію до розчинення утвореного осаду).
Хід визначення: до 5 крапель розчину яєчного білка додають 5 краплі реактиву Фоля і кип'ятять 2-3 хвилини. Після відстоювання 1-2 хвилин з'являється чорний або бурий осад.