Мікробіоло сульфітредукуючих клостридії (мікробіологія - об'єкти дослідження - харчові продукти,
SPS agar (Clostridium perfringens)
Поширена форма при бактеріальному отруєнні C. perfringens характеризується інтенсивними спазмами шлунка і діареєю. Симптоми проявляються через 8-22 години після вживання продуктів, що містять велику кількість бактерій C. perfringens, які продукують токсини, що викликають харчові отруєння. Окремі симптоми хвороби можуть зберігатися у хворих на протязі 1-2 тижнів. Відзначено кілька смертей через зневоднення організму і інших ускладнень. У рідкісних випадках інфікування також призводить до некротичного ентериту. Смертність від некротичного ентериту в результаті отруєння викликана некрозом кишечника. Інфекційна доза, як правило, перевищує 10 8 вегетативних клітин. Токсиноутворення пов'язано з процесом споруляции бактерій в шлунково-кишковому тракті.
TSC agar (Clostridium perfringens)
Морфологія бактерій і колоній
С. perfringens (сімейства Bacillaceae) мають великі (0,6-1 х 1-1,5 мкм) вегетативні клітини в формі коротких паличок з обрубаними під прямим кутом кінцями. Як правило, бактерії грампозитивні (в старих культурах можуть бути грамнегативними), позбавлені джгутиків і нерухомі, in vivo утворюють капсулу. Капсули найбільш виражені у вірулентних штамів. Форма клітини може варіювати в залежності від складу середовища. Спори великі (діаметр більше діаметру бактерії), округлі або овальні, розташовані центрально або субтермінально. На щільних середовищах C. perfringens утворює S- і R-колонії. S-колонії круглі, куполоподібні, з гладкими рівними краями, на початку росту прозорі, нагадують краплі роси, пізніше - каламутні, сірувато-білі. R-колонії неправильної форми, горбисті, з шорсткими нерівними краями, в глибині агару нагадують грудки вати. У деяких штамів утворюються слизові М-колонії.
Фізіолого-біохімічні особливості
C. perfringens - факультативні анаероби, хемоорганотрофи. Їх колонії на щільних середовищах оточені зоною гемолізу, який може бути або повним, або частковим. На рідких і напіврідких середовищах, особливо що містять глюкозу, зростання колоній відбувається дуже бурхливо, з виділенням Н2 і СО2. C. perfringens росте в анаеробних умовах на м'ясних поживних середовищах з додаванням цукру, оптимум рН - 7,2-7,4, зростання можливе і в інтервалі рН 5-8,5. Спорообразование зазвичай відбувається в грунті і кишечнику. Спори можна отримати in vitro на лужних середовищах, багатих білком і не містять зброджуваний вуглеводів. Спорообразование стимулюється прогреванием при 75 ° C протягом 10-15 хв. Серовар А щодо толерантний до короткострокових кисневим впливів. При варінні м'яса деякі штами гинуть за кілька хвилин, тоді як інші (серовар А і С) виживають при кип'ятінні і навіть автоклавуванні протягом 1-6 ч. Термостійкість спор серотипів B і D відносно невисока (гинуть при кип'ятінні протягом 15-30 хв ). Спори, що знаходяться в жировій тканині, зберігають життєздатність протягом тривалого часу. Спори C. perfringens відрізняються високою стійкістю до хімічних і фізичних дій. Протеолітичнаактивність слабка, оксідазо- і каталазонегатівни, інтенсивно створаживается молоко. Розщеплюють глюкозу та інші вуглеводи з утворенням кислоти. Тільки бактерії C. perfringens здатні відновлювати нітрати, розщеплювати лактозу і продукувати лецитиназу (α-токсин). Серовар (A-F) розрізняють за антигенними властивостями - здатністю утворювати різні екзотоксини.
Джерела і чинники передачі інфекції
Інфікування клостридіоз відбувається фекально-оральним і контактним способами. Спори С. perfringens здатні тривалий час зберігатися в навколишньому середовищі, зокрема, вони вегетують в грунті, багатою гумусом. У грунті і випорожненнях теплокровних найбільш часто виявляється бактерії серотипу А. З грунту ці бактерії з пилом потрапляють в приземному атмосферу і відкриті вододжерела. При газовій гангрені бактерії, а частіше їх суперечки можуть бути занесені в рани із зовнішнього середовища, а також з шкіри або з шлунково-кишкового тракту хворого. Місце постійного проживання серотипу С поки не встановлено. Ці бактерії викликають харчові токсикоінфекції у людини, їх виділяють з м'ясних і рибних консервів.
Інкубація в анаеробних умовах (Anaerobic Jar + газ-пак Anaerocult A)
патогенез
У людини С. perfringens викликає три типи уражень - харчові токсикоінфекції (ентеротоксемію), некротичний ентерит і газову гангрену (анаеробний сепсис). Для людини патогенними є серовар А (переважно), а також C і D, для тварин - B, C, D, E. Токсини і ферменти - основні фактори патогенезу. Мішенню їх дії є клітинні мембрани, що призводить до порушення клітинної проникності. Наслідком є набряк ураженої тканини, активація ендогенних протеаз і автолиз тканин. Серовар А і С продукують ентеротоксин - термолабільних протеїн, що викликає харчові токсикоінфекції середньої тяжкості. Захворювання проявляється в гострій формі, супроводжується загальною слабкістю, запамороченням, але температура підвищується рідко.
Некротичний ентерит (збудник - штами серовара С) протікає у важчій формі. При гострих формах захворювання може закінчитися смертю пацієнта протягом 12-24 год.
Газова гангрена розвивається при попаданні клітин С. perfringens на ранові поверхні, де в умовах пониженого вмісту кисню бактерії активно розмножуються. Збудник продукує, як мінімум, 12 токсинів і ферментів - факторів патогенезу. Поразка характеризується некрозом тканин і утворенням газу з гнильним запахом. Рясне утворення газу свідчить про переважно анаеробних ранових інфекціях. Їх збудник - паличка газової гангрени. Характерна особливість гістологічних препаратів, з вогнищ ураження - практично повна відсутність фагоцитів.
Fluorocult TSC agar (Cl. Perfringens)
методи виявлення
Кількісний облік клостридій передбачений при дослідженні потенційних джерел харчових отруєнь - харчових продуктів (м'ясних, молочних, рибних, м'яса птиці), а також грунту, води відкритих водойм і лікувальних грязей. Виявлення спор С. рerfringens рекомендовано при оцінці ефективності технологічних процесів очищення води, оскільки ці суперечки досить стійкі до знезараження хлором і іншими деззасобами.
Бактерії С. perfringens при зростанні в селективних (залізо-сульфітних) середовищах утворюють типові, пофарбовані в чорний колір колонії (трансформація сульфіту до сульфіду). Даний ознака використовується для виявлення бактерії. Суть методу полягає в посіві в чашки Петрі певної кількості досліджуваного зразка (або його розведення). Потім додають селективну середу і посів зверху заливають шаром тієї ж середовища. Посів інкубують в анаеробних умовах при 37 0 С протягом 20 (± 2) год, після чого проводять підрахунок типових колоній. Потім підтверджують ряд типових колоній і визначають кількість колоній С. perfringens (КУО на 1 г або 1 см 3 зразки).