Методичні вказівки до лабораторного практикуму з дисципліни «загальна біологія і мікробіологія» для
Методичні вказівки призначені для студентів, які навчаються за напрямом 240700.62 «Біотехнологія» та містять тематику лабораторних занять, мета яких прищепити студентам навички роботи в лабораторії з мікроорганізмами, вивчити їх морфологію і фізіологічні властивості, освоїти методи мікробіологічних робіт. Як об'єкти дослідження при виконанні робіт використовуються чисті культури мікроорганізмів - продуценти біологічно активних речовин.
Завданнями методичних вказівок є:
- ознайомлення студентів з обладнанням мікробіологічної лабораторії і способами стерилізації поживних середовищ, посуду, інвентарю;
- освоєння студентами техніки виділення чистих культур;
- вивчення студентами морфологічних і культуральних ознак найважливіших груп мікроорганізмів;
- освоєння студентами методів кількісного обліку мікроорганізмів, в тому числі і в харчових продуктах.
Правила роботи при виконанні мікробіологічного практикуму. Техніка безпеки в мікробіологічній лабораторії.
У лабораторію забороняється входити у верхньому одязі і класти на столи особисті речі. У мікробіологічної лабораторії дозволяється працювати тільки в халатах, які захищають одяг від контамінації мікроорганізмами, а також перешкоджають їх поширенню за межі лабораторії. Волосся необхідно заколювати.
За кожним студентом закріплюється постійне робоче місце, яке повинно підтримуватися в постійному порядку.
На всіх пробірках, чашках Петрі, колбах обов'язково пишеться назва мікроорганізму, дата його посіву, прізвище студента, номер групи.
У разі потрапляння досліджуваного матеріалу або культури мікроорганізму на руки, стіл, халат або взуття необхідно повідомити про це викладачеві і під його керівництвом провести дезінфекцію.
Після закінчення заняття робоче місце дезінфікується, використаний матеріал та інші предмети знешкоджуються, руки миються з милом, приміщення провітрюють і, по можливості, стерилізують за допомогою УФ-ламп.
1 Пристрій мікроскопа. Препарати для микроскопирования.
1.1 Мікроскоп. Основні правила микроскопирования.
Вивчення морфології і будови клітин мікроорганізмів, величини яких вимірюються мікрометрами, нанометрами, Ангстрема, можливо тільки за допомогою мікроскопів. У лабораторних умовах найчастіше використовується світлова мікроскопія.
Мікроскоп має механічну і оптичну частини (рис.1). Механічна частина включає штатив, предметний столик, тубус з револьверною голівкою, макро- і мікрометричні гвинти. Нижня частина штатива є опорою мікроскопа, верхня - тубусодержатель, який може переміщатися за допомогою механізму, що приводиться в дію обертанням макрометріческого і мікрометричного гвинтів, призначених для грубої і тонкої фокусування препарату відповідно. При обертанні гвинтів за годинниковою стрілкою тубусодержатель мікроскопа опускається, проти - піднімається. У верхній частині тубусодержатель знаходиться обертається навколо своєї осі револьвер. В отвори нижньої пластини револьвера угвинчені об'єктиви. У верхній кінець тубуса вкладаються змінні окуляри. Предметний столик круглої або прямокутної форми служить для розміщення на ньому препарату, має в центрі отвір для проходження променів, які висвітлюють препарат. Рухомий столик можна пересувати в горизонтальній площині за допомогою двох гвинтів, що знаходяться праворуч і ліворуч. Це дозволяє помістити будь-яку точку препарату в центр поля зору. На поверхні столика знаходяться два затиску для закріплення препарату. У разі нерухомого предметного столика, є гніздо для препаратоводієм, в яке він зміцнюється (рис 1).
Мал. 1. Схема мікроскопа "Биолам": 1 - окуляр; 2 - бінокулярна насадка; 3 - револьверний пристрій; 4 - об'єктив; 5 - предметний столик; 6 - конденсор; 7 - корпус колекторної лінзи; 8 - патрон з лампою; 9 - шарнір; 10 - рукоятка переміщення кронштейна конденсора; 11 - мікрогвинт; 12 - макровінт; 13 - тубусодержатель; 14 - гвинт для кріплення насадки; 15 - індикатор; 16 - вимикач.
Оптична частина мікроскопа складається з освітлювального апарату, об'єктива і окуляра. Освітлювальна частина мікроскопа складається з розташованих під предметним столиком конденсора і вбудованого освітлювача з низьковольтної лампою розжарювання. Конденсор представляє собою оптичну систему з двох лінз: плосковипуклой (верхньої) і двоопуклою (нижньої). Конденсор концентрує паралельні промені, що йдуть від джерела світла, в одній точці, фокусі, який повинен знаходитися в площині препарату. Конденсор спеціальним гвинтом, розташованим під предметним столиком, переміщається вгору і вниз. Під конденсором є ірисова діафрагма і відкидна оправа для світлофільтру. Діафрагму служить для затримання зайвих променів світла і дозволяє при необхідності зменшити апертуру конденсора (охоплення лінзи; характеризується кількістю променів, що потрапляють в лінзу). Лінзи конденсора разом з ірисовою діафрагмою вмонтовані в циліндричну оправу.
Об'єктив являє собою найбільш важливу частину мікроскопа. Він складається з системи лінз, укладених в металеву оправу, які дають дійсне збільшене зворотне зображення. Зовнішня лінза, звернена до предмету, називається фронтальною, це основна і єдина в об'єктиві лінза, що дає збільшення. Вище фронтальної розташовуються корекційні лінзи. Вони мають різну кривизну і виготовляються зі скла різної оптичної щільності. Корекційні лінзи призначені для усунення похибок і отримання більш чіткого зображення.
Мікроскопи постачають знімними об'єктивами з власним збільшення 8 х. 40 х і 90 х (100 х), позначеними на металевій оправі. Збільшення об'єктива залежить від фокусної відстані фронтальної лінзи і від її кривизни. Чим більше кривизна фронтальної лінзи, тим коротше фокусна відстань і тим більше збільшення об'єктива. Тому чим більше збільшення дає об'єктив, тим нижче його слід опускати над площиною препарату.
Окуляр служить для розгляду зображення об'єкта, збільшеного за допомогою об'єктива, і містить дві лінзи: очну (верхню) і збірну (нижню). Мікроскопи постачають окулярами зі збільшенням в 5, 7, 10, 12, 15 і 20 разів, що вказано на їх оправі (5 х. 7 х. 10 х. 12 х. 15 х і 20 х). Розрізняють моно- і бінокулярні мікроскопи.
Загальне збільшення. яке дає мікроскоп, визначається твором збільшення об'єктива на збільшення окуляра. Однак загальне збільшення ще не характеризує всіх можливостей мікроскопа. Збільшене зображення може виявитися як чітким, так і нечітким. Виразність одержуваного зображення визначається роздільною здатністю мікроскопа - мінімальним відстанню між двома точками, коли вони ще не зливаються в одну. Чим більше роздільна здатність мікроскопа, тим менші за розміром об'єкт можна побачити.
Мікроскопічний об'єкт можна розглядати в трьох типах системи: сухий - між лінзою об'єктива і об'єктом знаходиться повітря; водної - між лінзою об'єктива і об'єктом знаходиться крапля води - водна іммерсія; масляної - лінза об'єктива занурена в краплю иммерсионного масла - кедрового, касторової, вазелінового - масляна іммерсія.