Біохімічні методи діагностики моногенной патології
БІОХІМІЧНІ МЕТОДИ ДІАГНОСТИКИ моногенне ПАТОЛОГІЇ
БІОХІМІЧНІ МЕТОДИ ДІАГНОСТИКИ моногенне ПАТОЛОГІЇ
Різноманітні біохімічні методи використовують для діагностики моногенних хвороб з виявленими біохімічним дефектом з групи спадкових хвороб обміну. Біохімічна діагностика має тим більшу цінність, чим менше можливостей для точної і диференціальної діагностики тільки за допомогою клінічних і генеалогічних даних, чим менше клінічних проявів в ранніх стадіях хвороби, ніж надійніше діагностичні можливості гетерозиготного носійства, чим менше вартість цих досліджень в порівнянні з молекулярно-генетичними , імуногенетичними і ін. Біохімічні методи є унікальними при масовому скринінгу для ранньої діагностики спадкових хвороб у новоро денних. У цих випадках обстежують безвиборочние контингенти, і єдиним показанням є сам факт появи дитини на світ. Критеріями для включення патології в програму масового біохімічного скринінгу новонароджених є такі:
• висока частота народження в популяції (не менше 1:20 000);
• тяжкість ураження з незворотними наслідками у вигляді інвалідизації або ранньої смерті;
• можливість простий, надійної (чутливої, специфічною, без помилково негативні результати) і економічно виправданою діагностики в доклінічній стадії захворювання;
• можливість патогенетичної чи іншої ефективної корекції виявленого порушення.
До генетичним біохімічним методам діагностики відносять якісні, напівкількісні і кількісні. Крім крові, її плазми, сироватки і формених елементів, для біохімічних досліджень можуть використовуватися сеча, піт, культури клітин (фібробластів, лімфоцитів), меконій.
Якісні тести дешеві, прості, чутливі, дозволяють виявити надлишкові концентрації субстратів або їх похідних при ферментних блоках реакцій, в яких вони беруть участь. Для якісних тестів зазвичай використовують сечу. Якісні реакції діляться на універсальні, що визначають групу захворювань з провідним біохімічним дефектом (наприклад, ЦПХ-тест при мукополісахарідозов, проба Бенедикта на редуцирующие речовини і ін.), І специфічні (тест на гомогентизинової кислоту при алкаптонуріі, тест на мідь при хвороби Вільсона-Коновалова та ін.).
Напівкількісні і кількісні методи біохімічної діагностики проводяться і з сечею, і з кров'ю. З їх допомогою можна розділити метаболіти, що належать до одного класу хімічних речовин, і визначити концентрації певної речовини. До цих методів належать паперова, тонкошарова (одно- і двовимірна) та інші види хроматографії, електрофорез, хроматомассспектрометрія, спектрофотометрія, флуориметр, високоефективна рідинна хроматографія, тандемна мас-спектрометрії (дозволяє кількісно визначити до 3000 метаболічних маркерів). Ці методи складні, але високоточні і вимагають використання дорогого устаткування.
У цьому розділі доцільно розглянути використовуваний для цілей масового скринінгу мікробіологічний тест Гатрі, простий, дешевий і універсальний, в основі якого вирощування на мінімальної живильному середовищі мікроорганізмів, чутливих до визначеного метаболіту (на поверхню прозорої агарового середовища наносяться диски фільтрувального паперу, рівномірно просочені капілярної кров'ю) . За інтенсивністю росту мікробів можна судити про концентрацію цього метаболіту. Цей тест має особливу діагностичну значимість в тих регіонах, де немає медико-генетичних центрів і спеціалізованих генетичних біохімічних лабораторій з дорогим обладнанням та підготовленими кадрами.